细胞传代培养

操作步骤

1.将长满细胞的培养瓶中原来的培养液弃去。

2、加入0.5- -1ml 0.25%胰酶溶液，使瓶底细胞都浸入溶液中。

3、瓶口塞好橡皮塞，放在倒置镜下观察细胞。原代细胞培养:(1)shen脏原位灌洗:sd大鼠用25%乌拉坦腹整注---zui后仰卧固定。随着时间的推移，原贴壁的细胞逐渐趋于圆形，在还未漂起时将胰酶弃去，加入10m培养液终止---。观察---也可以用肉眼，当见到瓶底发白并出现细zhen孔空隙时终止---。一般室温---时间约为1- -3分钟。

4、用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液，分到另外两到三瓶中，实践培养液塞好橡皮塞，置37°c下继续培养。第二天观察贴壁生长情况。

附:---液配制方法:

称取0.25克胰酶蛋白酶(活力为1 : 250)， 加入100ml无ca2+、mg2+的hanks液溶解，滤器过滤chu菌，4°c保存,用前可在379c下回温。胰酶溶液中也可加入edta，使zui终浓度达0.02%。

细胞培养中常见的污染及解决方法

---污染

---污染后，培养基一般清澈，保持原色。yao物对细胞的ic50检测ic50(halfmaximalinhibitoryconcentration)是指被测量的拮抗剂的半抑制浓度。细丝可以在显微镜下观察到。，一些---类似于---碎片，但其中许多清晰可见，看起来像珊瑚，比较容易区分。此外，它们会慢慢长出细细的黑色细丝，因为它们生长得比较慢，不像---那样容易被发现，一旦发现培养基被污染，它们将很难存活。

解决方法：一旦被---污染，果断丢弃，然后对细胞房、co2 培养箱、器皿和培养基进行消毒。

原生动物污染

原生动物污染后，细胞培养基变得轻微浑浊。相较于直接对进行基于蛋白质分析的测序相比，得益于基因测序技术的发展，杂交瘤测序可以提供更准确更---的结果，防止蛋白测序中如亮氨酸/异亮氨酸较难区分等潜在风险。在显微镜下，大量的小点来回移动。虽然此时细胞仍能生长，但繁殖速度减慢，细胞生长状态不好，边缘不清，变得不透明。原生动物与细胞形成共生关系。同时，原生动物与细胞竞争营养。这种共生现象非常普遍，但以细胞为主，因为原生动物的数量相对较少，因而对细胞的正常生长没有影响，只有当它们达到一定数量时，才终---成为循环。

解决方法：原生动物污染的原因有很多，如液体消毒问题、操作问题、环境问题等，如果细胞足够，果断丢弃被污染的细胞和复苏细胞。如果要保留，需要购买使用相关的灭菌试剂。