腺---包装原理介绍

腺---是一种没有包膜的直径为79-90nm的颗粒，由252个 壳粒呈二十面体排列构成。每个壳粒的直径为7-9nm。另一个加入opti-mem、lipo2000，然后将两管混匀。衣壳里是线状双链dna分子，两端各有长约100bp的反向重复序列。人体腺--- 已知有33种，分别命名为ad1-ad33，研究详细得是ad2.

腺---是一种无包膜的球型结构的---，遗传物质为线型 双股dna形式。腺---的特点：（1）gan染范围广对人致病性低；（2）对增殖和非增殖细胞均具有gan染性；腺相关---的滴度在10^12~10^13gc/ml,可以满足各类整体实验的使用要求。（3）能有效进行增殖；（ 4）---滴度高；（5）不整合到染色体中，无插入致突变性；(6)外源基因装载容量大。由于腺---的这些特点使其广泛地应用于体 外基因转导、体内接种yi苗、和基因zhi疗等各个领域。

实验方法

1.获得目的基因序列；

2.构建---表达载体质粒；

3.表达载体质粒和包装质粒重组；

4.gan染hek293，包装出---；

5.---扩增、浓缩；

6.滴度测定。

lncrna芯片

long non-coding rnas（lncrnas）是一类转录本长度超过200 nt的功能性非编码rna分子。目前的研究已证实，lncrna参与x染色体沉默，基因组印记以及染色质修饰，转录ji活，转录干扰，核内运输等多种重要调控过程。lncrna-seq可---获得样本中全部的lncrnas信息，对lncrnas的类别、功能进行的深入分析，从而快速准确地获得与特定生物学过程（例如发育、---等）相关lncrna信息。随着对lncrna在哺乳动物进化及人类---发生和发展中作用的日益关注，lncrna调控机制已成为当前遗传学研究的---问题。

筛选出差异表达的lncrna是研究其在人类---发生中所扮演角色的基础。富衡生物为用户提供高通量的lncrna芯片进行lncrna表达谱分析，该芯片基于agilent的sureprint技术生产，实验。

技术优势

信息覆盖广泛：覆盖了多个quan威lncrna数据库发布的数据；提供人，小鼠，大鼠的lncrna检测。

lncrna和mrna同时检测：芯片上包含有的lncrna和新的mrna序列检测探针。一次芯片实验可同时对lncrna和mrna进行分析。

平台成熟---：采用agilent原位喷墨合成技术，了高检测灵敏度和特---。

数据分析：提供lncrna和mrna表达谱差异分析和功能分析，以及二者的关联分析。

活性氧检测试剂盒（reactive oxygen species assay kit）是一种利用荧光探针dcfh-da进行活性氧检测的试剂盒。dcfh-da本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成dcfh。而dcfh不能通透细胞膜，从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的dcfh生成有荧光的dcf。mirna在物种进化中相当保守，在动物、植物和---等中发现的mirna表达均有严格的组织特---和时序性。检测dcf的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。 本试剂盒提供了活性氧阳性对照试剂rosup以便于活性氧的检测。rosup是一种混合物（compound mixture），浓度为50mg/ml。

一、注意事项

1、探针装载后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。

2、探针装载完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的装载情况是否---。

3、尽量缩短探针装载后到测定所用的时间（---时间除外），以减少各种可能的误差。

4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴---手套操作。

22.同样的od用page检测，eb染色为什么深浅不一？

答：通常可以用eb染色的方法来判断双链dna的量(如质粒dna)，因为eb可以嵌合到双链dna中。而合成的单链dna，由于碱基组成不同，形成二级结构的可能性不同，eb的染色程度也会有差异，比如oligo(dt)等不形成二级结构，eb染色效果就非常差。所以不要用eb染色的方法来定量，而用紫外分光光度计检测。如测序序列已知，可通过序列比较以星号标出差异碱基处，提高工作效率。同样道理，用eb染色来照片不适合所有引物。

23.引物不纯会有什么后果？

答：引物不纯可能会导致：1)非特---扩增；2)无法用预先设计在引物5′端酶切位点的酶切开，---是没有保护碱基的引物；3) 用于测序出现双峰或乱峰。解决办法重新合成或重新纯化。

24.已经溶解的引物，为什么原先使用正常，而过一段时间再使用就不好了？

答：如果溶解引物的水ph过低或污染了菌或---酶，会使引物降解。使用时没有充分解冻混合，液体不均匀也可能会造成引物加入量不准确。建议分装引物，避免反复冻溶。该技术先用甲醛等试剂交联细胞内的“蛋白-rna”互作复合物，裂解细胞后，用靶蛋白特异的抗l体(或标签抗l体)做免l疫沉淀，获得“靶蛋白-rna”互作复合物，去交联分离其中的rna。建议使用10mmt ris ph7.5缓冲液溶解引物，因为有些蒸馏水的ph值比较低（ph4-5）, 引物在这种条件下不稳定。还有一种可能性是引物没有问题，而是pcr使用材料---是模板的与先前使用的不完全一致。