分子实验介绍——印迹（western blot）检测
通过sds-page凝胶将细胞或生物样品内的蛋白按照蛋白分子量从大到小规律分离开。经过page分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如纤维素薄膜或pvdf膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，现代分子生物学与基因工程，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的起反应，分子生物学实验有哪些，再与酶或同位素标记的第二起反应（目前主要用hrp标记的第二），经过底物显色或自显影以检测电泳分离的特---目的基因表达的蛋白成分（目前主要使用鲁米诺和二---的hrp反应发出荧光，分子生物检测技术，通过仪器或者胶片显色）。该技术广泛应用于检测蛋白水平的表达。
实验流程：细胞收集-细胞裂解，蛋白提取-蛋白变性-sds-page电泳-蛋白质转膜印记-蛋白封闭-目的孵育-二抗孵育-显色拍照
结果示例：
图 a不同大小的质粒转染细胞后，western blot检测图片；b a蛋白不同培养时间后western blot检测图片；c 使用image pro plus软件对a蛋白灰度检测，a蛋白表达变化统计图
rna提取
1.弃去培养液，用pbs清洗两次1-2。
2.弃去pbs，用1000u1枪吸干净残余pbs。
3.加1ml trizol研磨b 41。
4. 1.5miep管标号与每孔相对应备用。
5.研磨好的溶液转移至对应的 ep管。
6.往每个ep管中加入250ul，剧烈震荡30s， 冰上静置12min[问l。
7. 所有样品4c离心，转速: 13500转1分钟，时间: 15min.
8. 再次标记一批同样编号ep管。
9.离心后吸上清液400u1移入相应编号的ep管中，再加入400ul异充
分混匀。4c冰箱35min。
10. 4c离心，转速: 13500转1分钟，时间: 10min.
11.弃去.上清液，加1m175%---，轻摇7]。
12. 4c离心，10600转/分钟，时间: 5min.
13. 弃上清液滤纸吸干。
14. 加depc水10ul溶解，-80c保存。进行逆转录前测浓度。
组织rna提取
1、剪米粒大小组织块放入ep管中标号。
2、ep管中加300ul trizol浸泡30分钟或更久。
3、用研磨棒研磨，以肉眼很难看到组织为宜。
4、加700u1 trizol静 置5分钟。
mirna测序
microrna(mirna)是一种大小约21—23个碱基的单链小分子rna，是由具有发夹结构的约70-90个碱基大小的单链rna前体经过dicer酶加工后生成，不同于sirna（双链）但是和sirna密切相关。microrna通过和靶基因mrna碱基配对引导沉默复合体（risc）降解mrna或抑制mrna的翻译，从而在转录后水平调控蛋白表达（新发现mirna也能在转录水平调控基因表达）。mirna在物种进化中相当保守，在动物、植物和---等中发现的mirna表达均有严格的组织特---和时序性。mirna在细胞生长和发育过程中起多种作用，包括调控发育、分化、凋亡和增殖等。
目前研究mirna的方法主要是realtime-pcr、生物芯片技术以及第二代测序技术。基于第二代测序技术的mirna测序，南京分子生物，可以一次获得数百万条mirna序列，能够快速鉴定出不同组织、不同发育阶段、不同---状态下已知和未知的mirna及其表达差异，为研究mirna对细胞进程的作用及其生物学影响提供了有力工具。
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