转录组测序
转录组即某个物种或特定细胞在某一功能状态下产生的rna的总和,是研究细胞表型和功能的一个重要手段。与基因组不同的是,转录组的定义中包含了时间和空间的限定。同一细胞在不同的生长时期及生长环境下,其基因表达情况是不相同的。转录组测序(rna-seq)是指利用第二代高通量测序技术进行cdna测序,快速地获取某一物种特定qi官或组织在某一状态下的转录本。相对于传统芯片而言,rna-seq无需预先设计探针,即可对物种的细胞类型的转录组进行检测,能够提供较的数字化信号,更高的检测通量以及更广泛的检测范围,是目前深入研究转录组复杂性的---工具。
elisa 是一种结合抗原、抗ti特---反应和酶对底物高xiao催化作用的高敏感性免yi学实验技术。elisa 的基础是抗原或抗ti的固相化及抗原或抗ti的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗ti仍保持其免yi学活性,南京分子生物,酶标记的抗原或抗ti既保留其免yi学活性,又保留酶的活性。在测定时,分子生物检查什么病的,受检标本(测定其中的抗ti或抗原)与固相载体表面的抗原或抗ti起反应,洗涤使固相载体上形成的抗原抗ti复合物与液体中的其他物质分开,再加入酶标记的抗原或抗ti,通过反应使其结合在固相载体上。此时固相上的酶含量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物,底物被酶催化成为有色产物,分子生物学技术 pdf,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。
分子实验介绍——印迹(western blot)检测
通过sds-page凝胶将细胞或生物样品内的蛋白按照蛋白分子量从大到小规律分离开。经过page分离的蛋白质样品,分子生物学研究领域,转移到固相载体(例如纤维素薄膜或pvdf膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的起反应,再与酶或同位素标记的第二起反应(目前主要用hrp标记的第二),经过底物显色或自显影以检测电泳分离的特---目的基因表达的蛋白成分(目前主要使用鲁米诺和二---的hrp反应发出荧光,通过仪器或者胶片显色)。该技术广泛应用于检测蛋白水平的表达。
实验流程:细胞收集-细胞裂解,蛋白提取-蛋白变性-sds-page电泳-蛋白质转膜印记-蛋白封闭-目的孵育-二抗孵育-显色拍照
结果示例:
图 a不同大小的质粒转染细胞后,western blot检测图片;b a蛋白不同培养时间后western blot检测图片;c 使用image pro plus软件对a蛋白灰度检测,a蛋白表达变化统计图
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