大鼠shen小球内皮细胞分离培养
2.原代细胞培养:(1)shen脏原位灌洗:sd大鼠用25%乌拉坦腹整注---zui后仰卧固定。胸腹部消森并分离胸主动脉，以无菌的冷hank液漱朱洗血.同时剪破shen静脉利于液体流出。1-2min后shen脏色泽变白，动物实验外包服务合同，取出双shen冰浴保存。
(2)shen小球分离:参照green等方法改进。将灌洗后的shen脏撕下shen被膜.去除髓质后将皮质剪成约1-2mm的碎块，轻碾shen皮质依次通过80.120和200目钢筛。收集shen小球。
(3)shen小球---和培养；将提取的shen小球加人0.1% in 型胶原酶---后收集沉淀。以2x10* 的shen小球数接种于铺有1%明胶培养瓶内，加a配制好的内皮细胞培养液(mfm.hepes 20 mmnovl 20%胎牛xue清0. 66 u---/ml.血管内皮生长因子20 ng /ml、---钠100 u/ml.青莓su100 u/ml、链霉su100 μ/ml) .静止培养3 d后逐日观察shen小球的贴壁情况。待shen小球充分贴壁后常规换液.第3同进行纯化。
自噬流检测
自噬是调节真核细鹏生长、和能量代谢的重要生物学机制。细胞自噬行使其生物学功能的前提是自噬流的话化。大量证据表明自噬流受损与多种慢性炎性---，南京动物实验外包，---是、神经退行性---及组织纤维化的发病密切相关，动物实验外包室，目前对于自噬液的检别是自噬与其相关---研究领域的---。由于自噬流是一个曲多个步骤组成的动态过程。因此往需要精细的突验才能准确判断自啦流状态。
3d细胞培养
3d多细胞肿liu球是在体外应用组织培养方法使肿liu细胞以多细胞集聚体的形式生长成为具有三维结构的球体。与传统的2d贴壁细胞培养模型相比，3d多细胞肿liu球可以通过模拟三维细胞网络、细胞与基质、细胞与细胞之间的相互作用，从而贴近肿liu组织中相应的病理生理特征。因此， 3d多细胞肿liu球培养模型已经逐渐应用于gan细胞培养和分化、ai症研究、yao物和毒性筛选及组织工程等特定应用中。虽然3d多细胞肿liu球模型具有更---的实体肿liu生理相关性，但是与2d贴壁细胞培养模型相比，获得大量相对统一的3d多细胞肿liu球模型需要-系列的培养过程和表征手段。
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