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    2020-8-21

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细胞实验介绍——流式细胞术检测细胞周期和凋亡

流式细胞术检测细胞周期:

细胞周期:指细胞从---次分裂结束起到下一次分裂结束为止的活动过程,通常由g0/g1期、s期、g2期和m期组成。g0/g1期:有丝分裂发生,细胞分裂成两个细胞,进入下一个细胞周期,或者进入静止期(g0期),而g0期从dna含量上无法与g1期区分,细胞开始rna和蛋白质的合成,但dna含量仍保持二倍体。s期:dna开始合成,细胞核内dna的含量介于g1期和g2期之间。g2期和m期:当dna成为4倍体时,细胞进入g2期。g2期细胞继续合成rna及蛋白质,细胞实验 外包 ---,直到进入m期。

pi法是---的周期检测方法。pi为插入性---荧光染料,能选择性的嵌入---dna和rna双链螺旋的碱基之间与之结合,其结合的量与dna的含量成正比例关系,用流式细胞仪进行分析,就可以得到细胞周期各个阶段的dna分布状态,细胞实验外包,从而计算出各个期的百分含量。

一般流程:细胞收集-70%酒精固定过夜-pi染色-流式细胞仪检测。

细胞凋亡:细胞凋亡的早期就有细胞膜表面破损发生。破损时凋亡细胞表面的磷脂腺丝氨酸(ps)可以从细胞内膜翻转至细胞的外膜。该过程发生在之前,检测ps的表达,能反映早期凋亡。annexinv是ca2+依赖的磷脂结合蛋白,对ps有---的亲和性,并且可以与暴露于细胞外的ps相结合。利用这一原理,可以将annexinv标记荧光来识别早期的细胞凋亡。通常利用annexinv-fitc和碘化丙啶(pi)来区分凋亡和坏---。pi的膜通透性很差,因而只能标记坏死的细胞。

一般流程:细胞收集-pi-annexinv标记-流式细胞仪检测。

结果示例:



                                   图 a 细胞周期检测图;b 细胞凋亡检测图







小鼠成骨细胞和破骨细胞共培养模型的建立

细胞之间的相互调控作用奠定基础.方法利用24 h内新生小鼠颅骨和4~8周龄成年小鼠四肢长分别分离、培养成骨细胞和破骨细胞,采用间接接触的培养模式将接种了骨sui单核细胞的玻片或骨片置入提前24 h接种了成骨细胞的培养皿中进行共培养.共培养-定时间后进行破 骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,trap染色鉴定和骨吸收功能检测,并进一 步采用rt- pcr对破骨细胞标志酶基因基质金属蛋白酶.9(mmp-9)、trap 和组织蛋白酶k (cathepsin k )的表达进行检测结果共培养5天后---trap(+)多核细胞形成13天trap(+ )多核细胞数目达到高峰;骨吸收陷窝在共培养7天后开始出现,随着培养时间的延长,细胞实验外包平台,陷窝面积呈增加趋势;破骨细胞标志基因trap在共培养3天时开始表达,而mmp-9和cathepsin k则在共培养5天后表达结论共培养体系中成骨细胞对破骨细胞调控作用------的破骨细胞具有噬骨能力,该共培养模型可用于成骨细胞和破骨细胞之间的相互调控作用研究.



yao物对细胞的ic50检测  

     ic50 (half maximal inhibitory concentration)是指被测量的拮抗剂的半抑制浓度。它能指示某一yao物或者物质(yi制剂)在抑制某些生物程序(或者是包含在此程序中的某些物质,比如酶,南京细胞实验外包,细胞受体或是微生物)的半量。在凋亡方面,可以理解为一定浓度的某种药wu---肿liu细胞凋亡50%,该浓度称为50%抑制浓度,即凋亡细胞与全部细胞数之比等于50%时所对应的浓度,ic50值可以用来衡量yao物---凋亡的能力,即---能力越强,该数值越低,当然也可以反向说明某种细胞对yao物的耐受程度。



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