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    2020-8-23

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逆转录---构建及包装  

      逆转录---(retrovirus)是一类rna---。在逆转录酶的作用下,以---rna为模板合成cdna再通过dna、转录、翻译等过程形成---颗粒。逆转录---表达系统是一种新的重组蛋白表达系统,由逆转录---载体、辅助载体(表达---包装需要的蛋白质)和包装细胞系组成。逆转录---载体在外源基因表达、基因沉默、、生物制药等得到广泛的应用。逆转录---载体主要优点:转染范围广,可以各种细胞类型,转入的外源基因可完全融合,分子生物检测试剂,对细胞率高,细胞不产生病变,可建立细胞系长期持续表达外源基因。

     逆转录---载体系统共有两部分组成:包装细胞系和缺陷---本身。在逆转录---载体中,去除了正常的蛋白编码序列而保留了和包装信号,通过分子技术将目的基因插入此载体上,而包装细胞系能提供---载体包装成---粒子所需的结构蛋白。当重组---载体导入包装细胞后,缺陷---载体和包装细胞的互补作用共同完成---装配,该---颗粒可其它宿主细胞,此时目的基因进入该细胞并整合到细胞基因组中,导致插入序列在宿主细胞中表达,大分子生物检测服务,产生目的蛋白。宿主细胞不能像包装细胞那样为缺失结构基因的逆转录---提供结构蛋白,因而在宿主细胞内不会产生新的毒颗粒,---了该载体在生物制品领域的生物安全性问题。








腺相关---包装原理

腺相关---( adeno-asso---ted virus, aav)是一类细小---, 基铟组为单链dna ,对分裂细胞和非分裂细胞均具有gan染能力。通常需要腺---或疱zhen---帮助其在体内fu制扩增。重组腺相关---( recombinant aav, raav )是利用aav2型基因组与不同xue清型的衣壳蛋白基因组结合产生的混合体---载体,可将目的基因的cds区序列或者rnai干扰序列插入raav表达质粒中,包装---后gan染细胞完成对目的基因的操作。腺相关---具有gan染温和,免yi原性小,长效稳定表达的特点,主要应用于动物体内注射。源井生物提供的腺相关---颗粒经过超su离心纯化,并通过qpcr对---基因拷贝进行滴定。腺相关---的滴度在10^12~10^13gc/ml ,可以满足各类整体实验的使用要求。





单核苷酸多态性( snp )实验

snp (single nucleotide polymorphisn即单核苷酸多态性 ,是由于单个核苷酸改变而导致的---序列多态性(polymorphism)。据估计,在人类基因组中,大约每千个碱基中有一个snp ,无论是比较于度多态性(rflp)分析还是微标记(str) ,都要广泛得多。

实验方法原理:

snp (single nucleotide polymorphisn即单核苷酸多态性,是由于单个核苷酸改变而导致的---序列多态性(polymorphism)。据估计,南京分子生物检测,在人类基因组中,大约每千个碱基中有一个snp ,无论是比较于---性段长度多态性(rflp)分析还是微标记(str) ,都要广泛得多。snp是我们考察遗传变异的单位,据估计,人类的所有群体中大约存在一千万个snp位点。-般认为,相邻的snps倾向于一起遗传给后代。 于是,我们把位于染色体上某一区域的一组相关联的snp等位位点称作单体型( haplotype b大多数染色体区域只有少数几个常见的单体型(每个具有至少5%的频率),它们代表了一个群体中人与人之间的大部分多态性。-个染色体区域可以有很多snp位点,但是我们一-旦掌握了这个区域的单体型,就可以只使用少数几个标签snps(tagsnp)来进行基因分型,获取大部分的遗传多态模式。




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