1、细胞准备:细胞传到后,密度达到70%左右时进行转染;
2、细胞转染:取两个ep管,一个加入opti-mem、---质粒和包装质粒;另一个加入opti-mem、lipo2000,然后将两管混匀;
3、细胞孵育:将混合液逐滴加入细胞培养皿中,混匀后孵育;
4、收集---:转染后48h、72h收集含慢---的上清;
5、滴度检测:细胞为30%-50%时加入---上清液,检测阳性细胞比例。
凝胶阻滞迁移电泳检测服务(emsa)
二、大肠菌群检验方法:
由于大肠菌群指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的---,即:需氧及兼性厌氧、在37°c能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞。因此大肠菌群的检测一般都是按照它的定义进行。 目前国内采用的进出口食品大肠菌群检测方法主要有---和原商检局制订的行业标准。两个标准方法在检测程序上略有不同。
(一)---:---采用三步法,即:乳糖发酵试验、分离培养和证实试验。乳糖发酵试验:样品稀释后,选择三个稀释度,每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。36士1c培养48土2h,南京分子生物检测,观察是否产气。分离培养:将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上,36士1°c培养18-24h,观察菌落形态。证实试验:挑取平板上的菌落,进行革兰氏染色观察。同时接种乳糖发酵管36士1°c培养24土2h,观察产气情况。
报告:
根据证实为大肠阳性的管数,查mpn表,报告每100ml ( g)大肠菌群的mpn值。具体操作参见gb4789. 3-94 <---------食品卫生微生物学检验大肠菌群测定>
(二)原商检局制订的行业标准,大分子生物检测服务,等效采用美国fda的标准方法,用于对出口食品中的大肠进行检测。本方法采用两步法:推测试验:样品稀释后,选择三个稀释度,每个稀释度接种三管lst肉汤。36士1c培养48士2h,观察是否产气。证实试验:将产气管培养物接种煌绿乳糖胆盐(bglb)肉汤管中,分子生物检测报价,36士1°c培养48士2h,观察是否产气。以bglb产气为阳性。查mpn表,报告每ml(g)样品中大肠菌群的mpn值。具体操作参见sn0169-92<------进出口商品检验行业标准 出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠检验方法>
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