lncrna芯片
long non-coding rnas(lncrnas)是一类转录本长度超过200 nt的功能性非编码rna分子。目前的研究已证实,lncrna参与x染色体沉默,基因组印记以及染色质修饰,转录ji活,分子生物检测试剂,转录干扰,核内运输等多种重要调控过程。随着对lncrna在哺乳动物进化及人类---发生和发展中作用的日益关注,lncrna调控机制已成为当前遗传学研究的---问题。
筛选出差异表达的lncrna是研究其在人类---发生中所扮演角色的基础。富衡生物为用户提供高通量的lncrna芯片进行lncrna表达谱分析,该芯片基于agilent的sureprint技术生产,实验稳定---。
技术优势
信息覆盖广泛:覆盖了多个quan威lncrna数据库发布的数据;提供人,小鼠,大鼠的lncrna检测。
lncrna和mrna同时检测:芯片上包含有的lncrna和新的mrna序列检测探针。一次芯片实验可同时对lncrna和mrna进行分析。
平台成熟---:采用agilent原位喷墨合成技术,了高检测灵敏度和特---。
数据分析:提供lncrna和mrna表达谱差异分析和功能分析,分子生物检测价格,以及二者的关联分析。
分子与质粒载体构建
实验原理
外源dna与载体分子的连接就是dna重组,这样重新组合的dna叫做重组体或重组子。重组的dna分子是在dna连接酶的作用下,有mg2+、atp存在的连接缓冲系统中,将分别经酶切的载体分子与外源dna分子进行连接。dna连接酶有两种:t4噬菌体dna连接酶和大肠dna连接酶。两种dna连接酶都有将两个带有相同粘性末端的dna分子连在一起的功能,分子生物检测,而且t4噬菌体dna连接酶还有—种大肠连接酶没有的特性,即能使两个平末端的双链dna分子连接起来。但这种连接的效率比粘性末端的连接效率低,分子生物检测,一般可通过提高t4噬菌体dna连接酶浓度或增加dna浓度来提高平末端的连接效率。
t4噬菌体dna连接酶催化dna连接反应分为3步:,t4dna连接酶与辅助因子atp形成酶—amp复合物;然后,酶—amp复合物再结合到具有5’磷酸基和3’---切口的dna上,使dna腺苷化;后产生一个新的磷酸二酯键,把切口封起来。
dna重组的方法主要有粘端连接法和平端连接法,为了防止载体本身的自连,可以通过(牛碱性磷酸酶)cip处理克服。
连接反应的温度在37℃时有利于连接酶的活性.但是在这个温度下,粘性末端的氢键结合是不稳定的。因此人们找到了一个折中温度,即12-16℃,连接12-16h(过夜),这样既可大限度地发挥连接酶的活性,又---到短暂配对结构的稳定。
分子实验介绍——荧光检测
细胞荧光染色是以荧光物质标记而进行抗原定位的技术。在细胞中,通过特定的标记,可以检测目的蛋白表达量和表达定位。是细胞中的可直观观察细胞内蛋白定位和表达的实验方法。
实验流程:细胞固定-细胞膜破膜-蛋白封闭-目的蛋白结合-荧光二抗结合-dapi染色-荧光显微镜拍照或激光共---显微镜拍照。
结果示例:
细胞荧光染
通过观察细胞中蛋白的荧光强度和定位分析该蛋白的表达变化。
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