southern杂交
实验原理
southern印迹杂交(southern blot)是1975年由英---southern创建,是研究dna图谱的基本技术。southern印迹杂交是进行基因组dna特定序列定位的通用方法。一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经---性内切酶---的dnal片段,将胶上的dna变性并在原位将单链dnal片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上,经干烤或者紫外线照射固定,再与相对应结构的标记探针进行杂交,用放l射自显影或酶反应显色,从而检测特定dna分子的含量。
分子实验介绍——印迹(western blot)检测
通过sds-page凝胶将细胞或生物样品内的蛋白按照蛋白分子量从大到小规律分离开。经过page分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如纤维素薄膜或pvdf膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的起反应,再与酶或同位素标记的第二起反应(目前主要用hrp标记的第二),经过底物显色或自显影以检测电泳分离的特---目的基因表达的蛋白成分(目前主要使用鲁米诺和二---的hrp反应发出荧光,通过仪器或者胶片显色)。该技术广泛应用于检测蛋白水平的表达。
实验流程:细胞收集-细胞裂解,蛋白提取-蛋白变性-sds-page电泳-蛋白质转膜印记-蛋白封闭-目的孵育-二抗孵育-显色拍照
结果示例:
图 a不同大小的质粒转染细胞后,分子生物食品检测,western blot检测图片;b a蛋白不同培养时间后western blot检测图片;c 使用image pro plus软件对a蛋白灰度检测,a蛋白表达变化统计图
转录组测序
转录组即某个物种或特定细胞在某一功能状态下产生的rna的总和,分子生物检测,是研究细胞表型和功能的一个重要手段。与基因组不同的是,转录组的定义中包含了时间和空间的限定。同一细胞在不同的生长时期及生长环境下,其基因表达情况是不相同的。转录组测序(rna-seq)是指利用第二代高通量测序技术进行cdna测序,快速地获取某一物种特定qi官或组织在某一状态下的转录本。相对于传统芯片而言,rna-seq无需预先设计探针,大分子生物检测服务,即可对物种的细胞类型的转录组进行检测,南京分子生物检测,能够提供较的数字化信号,更高的检测通量以及更广泛的检测范围,是目前深入研究转录组复杂性的---工具。
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