南京生物检测-英瀚斯-生物检测方法

蛋白质定量组学服务

细胞内蛋白质组丰度的动态变化对不同生命过程有重要影响。例如在许多---的发生和发展进程中，常常伴随着某些蛋白质的表达异常。目前定量蛋白质组学技术主要分为标记(label)策略和非标记的(label free)定量策略，其中标记策略又分为体内标记(如 silac、15n 标记)，以及体外标记(如 itraq、tmt 标记) 。

传统的基于2d双向凝胶电泳分离的蛋白质组通常可以鉴定出约1000种蛋白，对全蛋白质组的覆盖仅在5~10%左右，不能满足高通量定量蛋白质表达谱分析的要求。我们结合样品制备与高分辨率、高灵敏度的液相色谱-质谱联用技术，可在细胞与组织类样品中鉴定直至多于10000个蛋白，对全蛋白质组的覆盖>;60%。结合生物信息学分析，为您构建高通量蛋白质定量表达谱。

rna提取

1.弃去培养液，用pbs清洗两次1-2。

2.弃去pbs，用1000u1枪吸干净残余pbs。

3.加1ml trizol研磨b 41。

4. 1.5miep管标号与每孔相对应备用。

5.研磨好的溶液转移至对应的 ep管。

6.往每个ep管中加入250ul，剧烈震荡30s， 冰上静置12min[问l。

7. 所有样品4c离心，人体生物检测，转速: 13500转1分钟，时间: 15min.

8. 再次标记一批同样编号ep管。

9.离心后吸上清液400u1移入相应编号的ep管中，再加入400ul异充

分混匀。4c冰箱35min。

10. 4c离心，转速: 13500转1分钟，时间: 10min.

11.弃去.上清液，加1m175%---，南京生物检测，轻摇7]。

12. 4c离心，10600转/分钟，时间: 5min.

13. 弃上清液滤纸吸干。

14. 加depc水10ul溶解，-80c保存。进行逆转录前测浓度。

组织rna提取

1、剪米粒大小组织块放入ep管中标号。

2、ep管中加300ul trizol浸泡30分钟或更久。

3、用研磨棒研磨，以肉眼很难看到组织为宜。

4、加700u1 trizol静 置5分钟。