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    2020-9-12

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染色质免l疫共沉淀技术(chip)

基于体内分析而发展的染色质免l疫沉淀分析chr omat in immunoprecipitat ionassay kit, chip)技术可以真实、完整地反映结合在dna序列上的调控蛋白。由于chip采用甲醛固定活l细胞或者组织的方法,因此能比较真实的反映细胞内tf与promoter的结合情况,还可以用来研究组蛋白的各种共价修饰与基因表达的关系。近年来,这种技术得到不断的发展和完善。采用结合微阵列技术在染色体基因表达调控区域检查染色体活性,是深入分析癌l症、心血l管病以及中央神经系统紊乱等---主要通路的一-种非常有效的工具。

染色质免l疫沉淀分析(chip) 的基本原理是在活l细胞状态下,当用甲醛处理时,相互靠近的蛋白与蛋白、蛋白与---(dna或rna)之间会产生共价键。细胞内,当f与promoter相互结合时,它们必然靠的比较近或者契合在一起,这个时候用甲醛处理,能使它们之间产生共价键。固定的蛋白质dna复合物通过超声或酶处理将其随机切断为-定长度范围内的染色质小片段然后通过抗原抗l体的特---识别反应沉淀此复合体,特---地富集目的蛋白结合的dnal片段,通过对目的片断的纯化与检测,从而获得蛋白质与dna相互作用的信息。通过qpcr或二代测序,筛选与目的蛋白互作的未知dna信息。








mirna测序

microrna(mirna)是一种大小约21—23个碱基的单链小分子rna,生物检测机构,是由具有发夹结构的约70-90个碱基大小的单链rna前体经过dicer酶加工后生成,分子生物检测,不同于sirna(双链)但是和sirna密切相关。microrna通过和靶基因mrna碱基配对引导沉默复合体(risc)降解mrna或抑制mrna的翻译,从而在转录后水平调控蛋白表达(新发现mirna也能在转录水平调控基因表达)。mirna在物种进化中相当保守,在动物、植物和---等中发现的mirna表达均有严格的组织特---和时序性。mirna在细胞生长和发育过程中起多种作用,包括调控发育、分化、凋亡和增殖等。

目前研究mirna的方法主要是realtime-pcr、生物芯片技术以及第二代测序技术。基于第二代测序技术的mirna测序,可以一次获得数百万条mirna序列,能够快速鉴定出不同组织、不同发育阶段、不同---状态下已知和未知的mirna及其表达差异,为研究mirna对细胞进程的作用及其生物学影响提供了有力工具。



elisa 是一种结合抗原、抗ti特---反应和酶对底物高xiao催化作用的高敏感性免yi学实验技术。elisa 的基础是抗原或抗ti的固相化及抗原或抗ti的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗ti仍保持其免yi学活性,酶标记的抗原或抗ti既保留其免yi学活性,又保留酶的活性。在测定时,生物检测价格,受检标本(测定其中的抗ti或抗原)与固相载体表面的抗原或抗ti起反应,洗涤使固相载体上形成的抗原抗ti复合物与液体中的其他物质分开,再加入酶标记的抗原或抗ti,南京生物检测,通过反应使其结合在固相载体上。此时固相上的酶含量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。


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