小鼠成骨细胞和破骨细胞共培养模型的建立
细胞之间的相互调控作用奠定基础.方法利用24 h内新生小鼠颅骨和4~8周龄成年小鼠四肢长分别分离、培养成骨细胞和破骨细胞,采用间接接触的培养模式将接种了骨sui单核细胞的玻片或骨片置入提前24 h接种了成骨细胞的培养皿中进行共培养.共培养-定时间后进行破 骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,trap染色鉴定和骨吸收功能检测,并进一 步采用rt- pcr对破骨细胞标志酶基因基质金属蛋白酶.9(mmp-9)、trap 和组织蛋白酶k (cathepsin k )的表达进行检测结果共培养5天后---trap(+)多核细胞形成13天trap(+ )多核细胞数目达到高峰;骨吸收陷窝在共培养7天后开始出现,随着培养时间的延长,陷窝面积呈增加趋势;破骨细胞标志基因trap在共培养3天时开始表达,而mmp-9和cathepsin k则在共培养5天后表达结论共培养体系中成骨细胞对破骨细胞调控作用------的破骨细胞具有噬骨能力,该共培养模型可用于成骨细胞和破骨细胞之间的相互调控作用研究.
平板克l隆形成实验基本步骤::
1、取对数生长期的各组细胞,分别用0.25%胰 蛋白酶---并吹打成单个细胞,生物细胞实验外包,并把细胞悬浮在10%胎牛的dmem培养液中备用。
2、将细胞悬液作梯度倍数稀释,每组细胞分别以每皿50、100、200 个细胞的梯度密度分别接种含10ml 37预温培养液的皿中,并轻轻转动,使细胞分散均匀。置37团5% co2及饱和湿度的细胞培养箱中培养2~3周。
3、经常观察,原代细胞培养实验外包,当培养皿中出现肉眼可见的时,终止培养。弃去上清液,用pbs小心浸洗2次。加4%---固定细胞5ml固定15分钟。然后去固定液,加适量gimsa应用染色液染10~30分钟,然后用流水缓慢洗去染色液,空气干燥。
4、将平皿倒置并叠加一张带网格的透明胶片,用肉眼直接计数,或在显微镜(低倍镜)计数大于10个细胞的数。后计算形成率。形成率= (数/接种细胞数) x100%平板形成试验方法简单,适用于贴壁生长的细胞。适宜底物为玻璃的、塑料瓶皿。试验成功的关键是细胞悬液的制备和接种密度。细胞一定要分散得好,不能有细胞团,接种密度不能过大。平板形成试验方法简单,适用于贴壁生长的细胞。适宜底物为玻璃的、塑料瓶皿。试验成功的关键是细胞悬液的制备和接种密度。细胞- -定要分散得好,不能有细胞团,南京细胞实验外包,接种密度不能过大。
杂交瘤细胞基因测序
杂交瘤细胞有丢失高特---高活性的风险,或者细胞状态不好乃至。而经过杂交瘤测序,可以获得相应的序列,可以以重组蛋白的方式来稳定获得;从而使得研发或生产者不必以杂交瘤细胞为载体保留该,而可以以碱基序列的形式进行保存和传播交流、鉴定。同时还可以使用获得的测序结果进行---等---方面的申请审批。有时为了进一步---生产或进行人源化等生物工程操作/修饰,流式细胞实验外包,有---了解杂交瘤所表达的对应的基因序列以进一步进行生物工程操作与生产。
相较于直接对进行基于蛋白质分析的测序相比,得益于基因测序技术的发展,杂交瘤测序可以提供更准确更---的结果,防止蛋白测序中如亮氨酸/异亮氨酸较难区分等潜在风险。
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