南京分子生物检测-英瀚斯-分子生物检测技术

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    2020-9-20

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southern杂交

实验原理

      southern印迹杂交(southern blot)是1975年由英---southern创建,是研究dna图谱的基本技术。southern印迹杂交是进行基因组dna特定序列定位的通用方法。一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经---性内切酶---的dnal片段,将胶上的dna变性并在原位将单链dnal片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上,南京分子生物检测,经干烤或者紫外线照射固定,再与相对应结构的标记探针进行杂交,用放l射自显影或酶反应显色,从而检测特定dna分子的含量。












分子实验介绍——荧光定量pcr检测

荧光定量pcr是检测生物样品中rna含量的普遍的方法,通过荧光染料或荧光标记的特---的探针,对pcr产物进行标记---,细胞分子生物学检测,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度。目前主要使用sybr green和taqman法对rna含量进行检测。sybr green在低样本量时成本较低,分子生物检测试剂,目前选用的较多。

sybr green i是一种只与dna双链结合的荧光染料。当它与dna双链结合时,发出荧光;从dna双链上释放出来时,荧光信号急剧减弱。因此,在一个体系内,其信号强度代表了双链dna分子的数量。sybr green荧光染料法定量pcr的基本过程是:1、开始反应,当sybr green染料与dna双链结合时发出荧光。2、dna变性时,sybr green染料释放出来,荧光急剧减少。3、在聚合延伸过程中,引物退火并形成pcr产物。4、聚合完成后,sybr green染料与双链产物结合,定量pcr系统检测到荧光的净增量加大。

实验流程:细胞或组织rna提取-rna浓度检测-rna逆转录-定量pcr检测。

结果示例:





图 a 基因扩增曲线图;b 基因扩增溶解曲线图;c mrna相对表达量变化

从图中可以扩增曲线可以看出目的rna扩增效果,溶解曲线可以看出引物识别特---情况,分子生物检测技术,通过使用δδct方法计算可以得到每个组中目的mrna表达变化。


蛋白质定量组学服务

细胞内蛋白质组丰度的动态变化对不同生命过程有重要影响。例如在许多---的发生和发展进程中,常常伴随着某些蛋白质的表达异常。目前定量蛋白质组学技术主要分为标记(label)策略和非标记的(label free)定量策略,其中标记策略又分为体内标记(如 silac、15n 标记),以及体外标记(如 itraq、tmt 标记) 。

传统的基于2d双向凝胶电泳分离的蛋白质组通常可以鉴定出约1000种蛋白,对全蛋白质组的覆盖仅在5~10%左右,不能满足高通量定量蛋白质表达谱分析的要求。我们结合样品制备与高分辨率、高灵敏度的液相色谱-质谱联用技术,可在细胞与组织类样品中鉴定直至多于10000个蛋白,对全蛋白质组的覆盖>;60%。结合生物信息学分析,为您构建高通量蛋白质定量表达谱。







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