透射电镜观察自噬小体方法
利用光学显微镜,借助相应的染色方法,可以观察细胞凋亡时会出现的一系列形态特征。常用的染色法包括台盼蓝、橙 / 化乙啶(ao/eb)、giemsa 和 he 法等。在光学显微镜下可以观察到核固缩、质浓缩和凋亡小体等典型的凋亡现象。
电镜形态学观察法是一种比较---、---的方法,被认为是确定细胞凋亡的金标准。电镜下凋亡细胞表现为染色质凝集、核浓缩、核裂解、胞浆收缩和胞膜具有发泡现象及凋亡小体出现等。
cell counting kit-8(简称cck-8)是一种基于wst-8的广泛应用于---和细胞毒性的检测试剂。wst-8化学名:2-(2-甲氧ji-4-硝ji---ji)-3-(4-硝ji---ji)-5-(2,4-二磺酸---)-2h-四唑单钠盐,是一种类似于mtt的化合物,它在电子载体1-甲氧ji-5-甲ji吩---鎓---二jia酯(1-methoxy pms)存在的情况下,被线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的橙黄色甲瓒产物(formazan)。---越多越快,细胞实验外包平台,颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅,对于同样的细胞,颜色的深浅与活xi胞的数量成正比,因此可利用这一特性直接进行---和毒性分析。
细胞传代培养
操作步骤
1.将长满细胞的培养瓶中原来的培养液弃去。
2、加入0.5- -1ml 0.25%胰酶溶液,细胞实验外包价格,使瓶底细胞都浸入溶液中。
3、瓶口塞好橡皮塞,放在倒置镜下观察细胞。随着时间的推移,细胞实验外包公司,原贴壁的细胞逐渐趋于圆形,在还未漂起时将胰酶弃去,加入10m培养液终止---。观察---也可以用肉眼,当见到瓶底发白并出现细zhen孔空隙时终止---。一般室温---时间约为1- -3分钟。
4、用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液,分到另外两到三瓶中,南京细胞实验外包,实践培养液塞好橡皮塞,置37°c下继续培养。第二天观察贴壁生长情况。
附:---液配制方法:
称取0.25克胰酶蛋白酶(活力为1 : 250), 加入100ml无ca2+、mg2+的hanks液溶解,滤器过滤chu菌,4°c保存,用前可在379c下回温。胰酶溶液中也可加入edta,使zui终浓度达0.02%。
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