睡眠剥夺模型
实验用金属箱直径35 cm, 每箱装1只大鼠。remsd 各组分别置于直径为6.5 cm的小站台上,对照组大鼠置于直径15 cm的大站台上,周围是水环境,水深3 cm,平台在水面以上1 cm,于平台以上14 cm 处放笼罩,上面放水和食物。水温和室温保持在25 c,每日换水并打扫实验箱。remsd 组大鼠在小台上屈曲而立,在快动眼睡眠(rapid eye movement sleep, rems) 时,由于伴随全身肌肉松弛和节律性垂头,大鼠落入水中而惊醒,再爬上站台。用此方法自18:00开始连续剥夺大鼠的rems至相应实验时间点。
旷场实验( open field test, oft )
实验装置为高60 cm、 底面边长100 cm、内壁涂黑的无盖方箱,小鼠动物实验外包,底面平均分为25个小方格,正上方2 m处架一---机,动物实验外包,镜头对准箱底,实验在安静环境下进行,南京动物实验外包,大鼠置于方箱底面中心,同时进行---和计时,3 min 后停止---,更换动物后,继续进行实验。2次实验之间清洗箱壁及底面,以免上次动物余留的信息影响下次实验结果。计分方法:通过放像设备,观察大鼠3 min内越过的格子数为水平得分,后肢站立次数为垂直得分,两者之和为oft总得分。remsd实验前后均进行旷场实验。
实验动物的采集方法
1. 大鼠、小鼠的采集:用颈椎脱臼法处死动物,剥离出胸骨或股骨,用吸取少量的hank平衡盐溶液,冲洗出胸骨或股骨中全部液。如果是取少量的作检查,可将胸骨或股骨剪断,将其断面的挤在有稀释液的玻片上,混匀后涂片凉干即可染色检查。
2. 大动物的采集:狗等大动物的采集可采取穿刺方法。 先将动物、固定、局部除毛、消毒皮肤,然后估计好皮肤到的距离,把穿刺针的长度固定好。操作人员用左手把穿刺点周围的皮肤绷紧,右手将穿刺针在穿刺点垂直刺入,动物模型实验外包,穿入固定后,轻轻左右旋转将穿刺针钻入,当穿刺针进入腔时常有落空感。狗的采集,一般采用髂骨穿刺。
狗等大动物常用的穿刺点:胸骨:穿刺部位是胸骨体与胸骨柄连接处。肋骨:穿刺部位是第5~7肋骨各点的中点。胫骨:穿刺部位是股骨内侧、靠下端的凹面处。如果穿刺采用的是肋骨,穿刺结束后要用胶布封贴穿刺孔,防止发生。
4种肺动脉高压(ph)动物模型肺血管重构模式的差异
方法:雄性sd大鼠(350-400g),分别通过腹主动脉-腔静脉分流(a-vf,n=10)、左肺切除(pe,n=10)、野百合碱注射(mct,n=10)、左肺切除+mct(pe+mct,n=12)4种方法建立ph模型.检测平均肺动脉压力(mpap)、rv/(lv+s)重量比值、肺小动脉中膜厚度百分比(wt%)、无肌性动脉肌化程度和新生内膜(neointima)形成、新生内膜增殖度和血管阻塞计分(vos).
结果:在pe+mct组(肺切除术后5周,mct注射后4周)右肺腺泡内血管出现了新生内膜病变,其它组均没有新生内膜病变形成.pe+mct组的动物出现了---的右心室肥大,动脉中膜明显增厚,平均肺动脉压(mpap)和无肌性血管肌化程度---增加;a-vf、pe和mct组仅形成轻-中度的右心室肥大、mpap升高和小动脉肌化.结论:左肺切除联合应用mct能成功---大鼠ph新生内膜模型,该模型能---地模拟人类---ph的病理改变,是研究梗阻性ph更为适用的动物模型.
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