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    2020-9-26

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转录组测序

转录组即某个物种或特定细胞在某一功能状态下产生的rna的总和,是研究细胞表型和功能的一个重要手段。与基因组不同的是,分子生物检测公司,转录组的定义中包含了时间和空间的限定。同一细胞在不同的生长时期及生长环境下,其基因表达情况是不相同的。转录组测序(rna-seq)是指利用第二代高通量测序技术进行cdna测序,分子生物检测,快速地获取某一物种特定qi官或组织在某一状态下的转录本。相对于传统芯片而言,rna-seq无需预先设计探针,即可对物种的细胞类型的转录组进行检测,能够提供较的数字化信号,更高的检测通量以及更广泛的检测范围,是目前深入研究转录组复杂性的---工具。











甲l基化特---的pcr

herman 等( 1996 )在使用重---酸盐处理的基础上新建的一种方法。该方法敏感性高,主要用于作定性研究。用------盐处理基因组dna,所有未发生jia基化的胞嘧定被转化为尿嘧ding,而jia基化的胞嘧定不变;随后设计针对jia基化和非jia基化序列的引物进行pcr。通过电泳检测msp扩增产物,如果用针对处理后jia基化dna链的引物能得到扩增片段,则说明该位点存在jia基化;反之,南京分子生物检测,说明被检测的位点不存在jia基化。

特点:适用范围广,能够检测特异位点是否发生jia基化。

------盐测序法(bisulfite sequencing pcr,bsp)

------盐修饰后测序法( bsp ) frommer 等( 1992 )提出的研究 dna jia基化方法,此方法---性及jing确度高,能明确目的片段中每一个 cpg 位点的jia基化状态。用------盐处理基因组dna,所有未发生jia基化的胞嘧ding被转化为尿嘧ding,而jia基化的胞嘧ding不变。随后设计bsp引物进行pcr,在扩增过程中尿嘧定全部转化为胸腺嘧定,zui后对pcr产物进行测序就可以判断cpg位点是否发生jia基化,称为bsp-直接测序法。将pcr产物克long至载体后进行测序,分子生物学检测多少钱,可以提高测序成功率,这种方法称为bsp-ke隆测序法。

特点:jing确度高,能够准确检测出jia基化的程度百分比。







凝胶阻滞迁移电泳检测服务(emsa)


凝胶迁移或电泳迁移率实验(electrophoretic mobility shift assay,emsa)是一种研究dna/rna结合蛋白和其相关的dna/rna结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。依据实验需要,设计标记探针、非标记探针、蛋白特---抗ti等参照物,基于dna-蛋白质或rna-蛋白质复合体在聚bing烯---凝胶电泳(page)中有不同迁移率的原理,当转录因子与特异的dna或rna结合后,其在page中的迁移率将小于未结合---白转录因子的dna,从而检测到活化的与dna或rna结合的蛋白转录或调节因子。






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