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  全转录组测序 

全转录组是指特定组织或细胞在特定状态下所有转录产物的总和，南京细胞实验外包，包括mrna和各种noncoding rna。我们知道生物体本身的转录过程是一个动态变化且十分复杂的分子作用网络，如果只是对某个单一rna分子的研究，有时并不能准确的发现分子作用机制。而竞争性内源rna(cerna)理论阐述了一种全新的转录调控模式：cerna（包括lncrna、circrna、mrna、假基因等）分子能够通过mirna应答元件（microrna respe element， mre）竞争性地结合相同的mirna来调节彼此的表达水平。举个例子：mirna会导致基因沉默现象发生，而如果lncrna竞争性结合了mirna，从而影响了mirna基因沉默功能实现。

      cerna是目前转录调控领域的---内容之一，通过全转录组研究能够系统性的阐述cerna的分子作用机制。目前对全转录组简便的方法就是构建2个测序---分别进行测序。标准的生物信息学分析能够得到mrna、lncrna、circrna、mirna各自的研究内容，靶向调控网络、cerna网络、共表达网络分析可以将这几种rna联合起来分析，从而发现新的调控网络模型。去除rrna的链特------，含有的rna信息含量十分丰富，通过测序和生物信息学分析能够得到mrna、lncrna、circrna的鉴定及注释信息。不过该---构建时会进行片段化选择从而滤掉了small rna的信息，所以需要另外再构建一个small rna---，细胞实验外包服务，进行测序分析后可以得到mirna和其他small rna的鉴定及注释信息。全转录组测序方案路线图如下所示：

分子实验介绍——印迹（western blot）检测

通过sds-page凝胶将细胞或生物样品内的蛋白按照蛋白分子量从大到小规律分离开。经过page分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如纤维素薄膜或pvdf膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的起反应，再与酶或同位素标记的第二起反应（目前主要用hrp标记的第二），经过底物显色或自显影以检测电泳分离的特---目的基因表达的蛋白成分（目前主要使用鲁米诺和二---的hrp反应发出荧光，通过仪器或者胶片显色）。该技术广泛应用于检测蛋白水平的表达。

实验流程：细胞收集-细胞裂解，蛋白提取-蛋白变性-sds-page电泳-蛋白质转膜印记-蛋白封闭-目的孵育-二抗孵育-显色拍照

结果示例：

图 a不同大小的质粒转染细胞后，western blot检测图片；b a蛋白不同培养时间后western blot检测图片；c 使用image pro plus软件对a蛋白灰度检测，a蛋白表达变化统计图