shrna质粒构建试验-英瀚斯

microrna芯片:

rna干扰(rna interference， rnai)现象是一种进化上保守的抵御---或外来---qin犯的防御机制。将含有靶基因mrna同源互补序列的rna（double strand rna， dsrna）导入细胞后，能够特异地识别该mrna，引起mrna的降解，从而导致相应的功能缺失。rnai提供了一种经济、快捷、gao效的抑制特异基因表达的技术手段，该技术已被广泛用于研究基因功能和chuan染性---及恶xingzhong瘤基因zhi疗领域。目前常用的rna干扰手段为mirna、 shrna和sirna等。

mirna是一类可以通过rnai机制调节基因表达的内源性小rna，人工mirna与shrna的设计原理基本相同，由于mirna具有内源性，因此其更易产生有效的基因沉默。

技术流程：

dsrna或pre-mirna被导入细胞后，crispr-cas9---包装试验，能够被一种特异的---内切酶（dicer）识别并切割成为小片段，这些片段在rna解旋酶的作用下解链。继之反义链在与体内一些酶（包括内切酶、外切酶、解旋酶等）结合形成rna---的沉默复合物（rna-induced silencing complex，risc），risc与mrna同源区进行特---结合，若mirna与mrna的结合位点配对，则切割mrna；若mirna与mrna的结合位点不配对，则抑制mrna的翻译。