分子生物学检测服务
随着生命科学和化学的不断发展，人们对生物体的认知已经逐渐深入到微观水平。从单个的生物体到qi官到组织到细胞，再从细胞结构到---和蛋白的分子水平，人们意识到可以通过检测分子水平的线性结构（如---序列），来横向比较不同物种，同物种不同个体，同个体不同细胞或不同生理（病理）状态的差异。这就为生物学和医学的各个领域提供了技术平台。分子生物学检测技术是现代分子生物学与分子遗传学取得进步的结晶，是在人们对基因的结构以及基因的表达和调控等生命本---题的认识日益加深的基础上产生的。近年来，分子生物学检测技术的方法学研究取得了进展，先后建立了各种分子生物学检测技术。
甲l基化特---的pcr
herman 等（ 1996 ）在使用重---酸盐处理的基础上新建的一种方法。该方法敏感性高，主要用于作定性研究。用------盐处理基因组dna，所有未发生jia基化的胞嘧定被转化为尿嘧ding，而jia基化的胞嘧定不变；随后设计针对jia基化和非jia基化序列的引物进行pcr。通过电泳检测msp扩增产物，如果用针对处理后jia基化dna链的引物能得到扩增片段，western blot检测实验，则说明该位点存在jia基化；反之，说明被检测的位点不存在jia基化。
特点：适用范围广，能够检测特异位点是否发生jia基化。
------盐测序法（bisulfite sequencing pcr，bsp）
------盐修饰后测序法（ bsp ） frommer 等（ 1992 ）提出的研究 dna jia基化方法，此方法---性及jing确度高，能明确目的片段中每一个 cpg 位点的jia基化状态。用------盐处理基因组dna，所有未发生jia基化的胞嘧ding被转化为尿嘧ding，而jia基化的胞嘧ding不变。随后设计bsp引物进行pcr，在扩增过程中尿嘧定全部转化为胸腺嘧定，zui后对pcr产物进行测序就可以判断cpg位点是否发生jia基化，称为bsp-直接测序法。将pcr产物克long至载体后进行测序，可以提高测序成功率，这种方法称为bsp-ke隆测序法。
特点：jing确度高，能够准确检测出jia基化的程度百分比。
1、细胞准备：细胞传到后，密度达到70％左右时进行转染；
2、细胞转染:取两个ep管，一个加入opti-mem、---质粒和包装质粒；另一个加入opti-mem、lipo2000，然后将两管混匀；
3、细胞孵育：将混合液逐滴加入细胞培养皿中，混匀后孵育；
4、收集---：转染后48h、72h收集含慢---的上清；
5、滴度检测:细胞为30%－50％时加入---上清液，检测阳性细胞比例。
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