南京细胞3d培养操作-英瀚斯

流式细胞分选

流式细胞分选技术是利用流式细胞分选仪，以高能量激光照射高速流动状态下被荧光色素染色的单细胞或微粒，测量其产生的散射光和发射荧光的强度，从而对细胞(或微粒)的物理、生理、生化、免yi、遗传、分子生物学性状及功能状态等进行定性或定量检测的--种现代细胞分析技术，它可根据发射光的荧光强度和波长将发光颗粒亚群分开并可实现单ke隆分选，能复杂样本中的细胞进行鉴定、分类、定量和分离，单次可同时对其中一种到四种特定细胞进行速分选纯化、高通量单分选或细胞芯片制备。分选后的细胞能直接用于培养、移植、---提取、单细胞pcr扩增或原位杂交等，可进一步进行细胞基因、蛋白、功能水平的研究和不同细胞之间的差异化研究。硬件中样本细胞丢弃的比例低于5%，---样本中目标细胞的高回收率。

磁性细胞标记方式

应用macs技术进行磁性细胞分选重要的一点是高的标记。要尽可能地增强阳性细胞的标记，并减弱背景染色。有两种基本的磁性标记方式:直接标记和间接标记。

1、直接磁性细胞标记(direct ---ic cell labeling)

(磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞)直接标记是快速、zui特异的磁性标记方法。目前有多种分选人、小鼠、大鼠以及非人类灵长类细胞的macs直标微珠可供选用。

2、间接磁性细胞标记(indirect ---ic cell labeling )

(磁珠结合不需要的细胞，游离于磁场的细胞为所需细胞)间接磁性细胞标记需要联合使用单ke隆或者多ke隆抗ti和macs间标微珠。未结合抗ti、生物素化抗ti或者荧光素标记抗ti均可作为一抗标记细胞，再使用抗免yi球蛋白微珠、抗生物素或链霉亲和素微珠、抗荧光素微珠作为二抗磁性标记细胞。几乎针对任何种系任何细胞的任何一种单抗或多抗，均可用于间接标记。间接标记主要在如下情况时选用:当没有直标磁珠时;需要用几种抗ti的混合物同时分选或去除多种类型的细胞;间接标记有放大作用，耐药细胞株构建操作，因此可在磁性分选抗原表达弱的目的细胞时使用;使用自备或者配体的磁珠分选中。( -般而言，阴性分离法的磁珠用量比阳性分离法的大，阳性分离法用行更多。)