1、细胞准备：细胞传到后，密度达到70％左右时进行转染；
2、细胞转染:取两个ep管，一个加入opti-mem、---质粒和包装质粒；另一个加入opti-mem、lipo2000，然后将两管混匀；
3、细胞孵育：将混合液逐滴加入细胞培养皿中，混匀后孵育；
4、收集---：转染后48h、72h收集含慢---的上清；
5、滴度检测:细胞为30%－50％时加入---上清液，检测阳性细胞比例。
elisa 是一种结合抗原、抗ti特---反应和酶对底物高xiao催化作用的高敏感性免yi学实验技术。elisa 的基础是抗原或抗ti的固相化及抗原或抗ti的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗ti仍保持其免yi学活性，酶标记的抗原或抗ti既保留其免yi学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本(测定其中的抗ti或抗原)与固相载体表面的抗原或抗ti起反应，洗涤使固相载体上形成的抗原抗ti复合物与液体中的其他物质分开，再加入酶标记的抗原或抗ti，通过反应使其结合在固相载体上。此时固相上的酶含量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。
甲l基化特---的pcr
herman 等（ 1996 ）在使用重---酸盐处理的基础上新建的一种方法。该方法敏感性高，主要用于作定性研究。用------盐处理基因组dna，所有未发生jia基化的胞嘧定被转化为尿嘧ding，而jia基化的胞嘧定不变；随后设计针对jia基化和非jia基化序列的引物进行pcr。通过电泳检测msp扩增产物，如果用针对处理后jia基化dna链的引物能得到扩增片段，则说明该位点存在jia基化；反之，说明被检测的位点不存在jia基化。
特点：适用范围广，能够检测特异位点是否发生jia基化。
------盐测序法（bisulfite sequencing pcr，bsp）
------盐修饰后测序法（ bsp ） frommer 等（ 1992 ）提出的研究 dna jia基化方法，此方法---性及jing确度高，能明确目的片段中每一个 cpg 位点的jia基化状态。用------盐处理基因组dna，所有未发生jia基化的胞嘧ding被转化为尿嘧ding，而jia基化的胞嘧ding不变。随后设计bsp引物进行pcr，荧光定量pcr检测操作，在扩增过程中尿嘧定全部转化为胸腺嘧定，zui后对pcr产物进行测序就可以判断cpg位点是否发生jia基化，称为bsp-直接测序法。将pcr产物克long至载体后进行测序，可以提高测序成功率，这种方法称为bsp-ke隆测序法。
特点：jing确度高，能够准确检测出jia基化的程度百分比。
汉中荧光定量pcr检测实验-英瀚斯(图)由南京英瀚斯生物科技有限公司提供。南京英瀚斯生物科技有限公司在技术合作这一领域倾注了诸多的热忱和热情，英瀚斯一直以客户为中心、为客户创造价值的理念、以品质、服务来赢得市场，衷心希望能与社会各界合作，共创成功，共创。相关业务欢迎垂询，联系人：戴经理。
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