rip
技术概述
rip是研究体内蛋白与rna互作的重要技术。该技术先用甲醛等试剂交联细胞内的“蛋白-rna”互作复合物，实时定量pcr，裂解细胞后，用靶蛋白特异的抗l体(或标签抗l体)做免l疫沉淀，获得“靶蛋白-rna”互作复合物，去交联分离其中的rna;针对预测的靶蛋白结合rna的序列设计引物，
做qpcr实验，验证预测的rna是否与靶蛋白有结合，或者将分离出来的rna做高通量测序，筛选到可能与靶蛋白结合的rna。
技术流程
细胞交联-***细胞裂解-***免l疫共沉淀***去交联***rna分离***建库***高通量测序(或qpcr)。
1、细胞准备：细胞传到后，---，密度达到70％左右时进行转染；
2、细胞转染:取两个ep管，pcr引物设计，一个加入opti-mem、---质粒和包装质粒；另一个加入opti-mem、lipo2000，然后将两管混匀；
3、细胞孵育：将混合液逐滴加入细胞培养皿中，混匀后孵育；
4、收集---：转染后48h、72h收集含慢---的上清；
5、滴度检测:细胞为30%－50％时加入---上清液，商洛pcr，检测阳性细胞比例。
免yi共沉淀（co-ip检测）是以抗ti和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的方法。当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质与蛋白质间的相互作用也被保留下来。用预先固化在beads上的蛋白质a的抗ti免yi沉淀a蛋白，那么与a蛋白在体内结合的蛋白质b也能一起沉淀下来，再通过蛋白变性分离，对b蛋白进行检测，进而证明两者间的相互作用。
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