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    2020-12-8

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emsa实验

emsa:凝胶迁移或电泳迁移率检测是一种检测蛋白质和dna序列相结合的技术,初用于研究dna结合蛋白和其相关的dna结合序列相互作用,可用于定性和定量分析。分为2种类型:同位素标记探针,非同位素标记探针。

通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32p同位素标记的dna或rna探针一同保温,在非变性的聚bing烯凝胶电泳上,分离复合物和非结合的探针。dna-复合物或rna-复合物比非结合的探针移动得慢。同位素标记的探针依研究的结合蛋白的不同,可是双链或者是单链。当检测如转录调控因子一类的dna结合蛋白,可用纯化蛋白,部分纯化蛋白,或核细胞抽提液。在检测rna结合蛋白时,依据目的rna结合蛋白的位置,可用纯化或部分纯化的蛋白,pcr引物设计,也可用核或胞质细胞抽提液。竞争实验中采用含蛋白结合序列的dna或rn片duan和gua核苷酸片段(特异),和其它非相关的片段(非特异),来确定dna或rna结合蛋白的特---。在竞争的特异和非特异片段的存在下,依据复合物的特点和强度来确定特异结合。















分子生物学检测

分子生物学作为现代生物技术中zui为---的实验手段之一,已经广泛渗透到生命科学的各个领域,在基础研究、医l疗诊断等领域均起到了非常重要的作用。

     借助---技术优势,英瀚斯生物特配备了高l效的仪器设备,如slan 48p 荧光定量pcr检测系统、pcr仪、电泳仪、冷冻离心机、高速离心机等。目前公司可为您提供反转录pcr、荧光定量pcr、凝胶电泳迁移率等检测服务,---缩短您的实验周期、降低您的实验成本。










动物组织细胞基因组dna提取

操作步骤

1. 取新鲜或冰冻动物组织块0.1g(0.5cm3),尽量剪碎。置于玻璃匀浆器中,加入1ml的细胞裂解缓冲液匀浆至不见组织块,转入1.5ml 离心管中,加入蛋白酶k

(500ug/ml)20μl,混匀。在65℃恒温水浴锅中水浴30min,也可转入37℃水浴12~24h,间歇振荡离心管数次。于台式离心机以12000 rpm离心5min,取上清液入另

一离心管中。

2.加2倍体积异,倒转混匀后,pcr,可以看见丝状物,用100ul 吸头挑出,凉干,用200ul te 重新溶解。(可进行pcr反应等,---,需要进一步纯化的按下列步骤进行)

3.加等量的酚??振荡混匀,离心12000 rpm,pcr实验室,5min。

4.取上层溶液至另一管,加入等体积的?,振荡混匀,离心12000 rpm,5min。

5. 取上层溶液至另一管,加入1/2体积的7.5mol/l氨加入2倍体积的无水---,混匀后室温沉淀2min ,离心12000 rpm ,10min。

6.小心倒掉上清液,将离心管倒置于吸水纸上,将附于管壁的残余液滴除掉。

7.用1ml 70%---洗涤沉淀物1次,离心12000 rpm , 5min。

8.小心倒掉上清液,将离心管倒置于吸水纸上,将附于管壁的残余液滴除掉,室温干燥。

9.加200ul te重新溶解沉淀物,然后置于4℃或?c20℃保存备用。

10.吸取适量样品于genequant上检测浓度和纯度。






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