干细bao培养---分化
干细bao是一类具有自我更新、高度增殖和多项分化潜能的细胞,理论上具有---分裂能力,细胞,在特定条件下,细胞实验外包,可分化成特定组织。通常改变抑制 es 细胞不分化状态的培养条件, es 细胞就可以分化成多种细胞类型。es 细胞具有的这种能力在体外增殖并保持未分化状态及其多向分化潜能的生物学特性,使其广泛应用于生物学研究的各个领域, 它的潜在医学应用价值已成为范围内研究的---。目前,已---的自es细胞---分化的细胞主要包括胰岛细胞、造血细胞、肝细胞、神经细胞、脂肪细胞、心肌细胞、内皮细胞、上皮细胞、成骨细胞、软gu细胞和黑素细胞等。
细胞实验介绍——细胞运动能力检测:
细胞划痕实验是体---拟细胞迁移能力和修复能力快捷的检测方法。在长满的细胞培养板或者培养皿中,感受态细胞,沿着中线使用移液器枪头或者其他硬物划1-3条平行的直线,去除中线的细胞,细胞在0h、12h、24h后,观察细胞往中线迁移情况,判断细胞迁移能力。
一般流程:细胞接种培养-划痕-不同时间点拍照
细胞迁移和侵袭实验是体---拟细胞迁移和侵袭能力的检测方法。使用不同孔径的聚---膜transwell小室放入培养板中,将细胞接种于小室中,利用培养液成分的差异---细胞运动,检测细胞的迁移和侵袭能力的差异。
一般流程:transwell小室准备-细胞接种-细胞培养-transwell小室染色-显微镜拍照
结果示例:
图 a 细胞划痕实验图;b,c 细胞迁移和侵袭实验图
小鼠精原gan细胞分离富集和培养
成年小鼠gao丸中约有108个细胞,其中约有 2×104个是精原gan细胞,仅占gao丸生精上皮细胞总数的 0.02~0.03%,精原gan细胞数量太少不利于体外培养.分离和富集精原gan细胞成为精原gan细胞体外培养能否成功的前提条件.寻找分离和富集小鼠精原gan细胞有效方法. 方法:出生6-8天小鼠为实验对象,先用0.25%胰酶1mm edta---gao丸10min,用胎牛xue清终止---,用一次40-um孔径的滤器过虑制成单 细胞悬液,30%percoll不连续密度梯度法离心富集精原gan细胞,再根椐未分化精原gan细胞表面thy1.2(cd90.2)阳性cd117(c- kit)阴性特点用流式细胞仪将精原gan细胞分选出来,并在体外进行培养尝试. 结果:30%percoll密度梯度离心前cd117(c-kit)阳性细胞占13.80±3.34%,cd90.2阳性细胞占28.98±4.51%, 二者都阳性细胞占8.98±2.98%,cd117阴性cd90.2阳性细胞占18.36±2.67%;离心后 cd117(c-kit)阳性细胞占12.37±3.34%,cd90.2阳性细胞占56.98±4.51%,二者都阳性细胞占 8.20±3.98%,---实验,cd117阴性cd90.2阳性细胞占32.36±3.67%;cd117(c-kit)阳性细胞和二者都阳性细胞所占百分比前后 比较差异无---性(p>;0.1),cd90.2阳性细胞和cd117阴性和cd90.2阳性细胞所占百分比前后比较差异有---性 (p<0.05);采用cd117和cd90.2作为标志分子,percoll离心后细胞悬液经facs分选后获得细胞纯度
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