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    2020-12-15

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分子实验介绍——荧光定量pcr检测

荧光定量pcr是检测生物样品中rna含量的普遍的方法,通过荧光染料或荧光标记的特---的探针,对pcr产物进行标记---,---多少钱,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析,实时荧光定量pcr,计算待测样品模板的初始浓度。目前主要使用sybr green和taqman法对rna含量进行检测。sybr green在低样本量时成本较低,目前选用的较多。

sybr green i是一种只与dna双链结合的荧光染料。当它与dna双链结合时,发出荧光;从dna双链上释放出来时,荧光信号急剧减弱。因此,在一个体系内,其信号强度代表了双链dna分子的数量。sybr green荧光染料法定量pcr的基本过程是:1、开始反应,当sybr green染料与dna双链结合时发出荧光。2、dna变性时,sybr green染料释放出来,荧光急剧减少。3、在聚合延伸过程中,引物退火并形成pcr产物。4、聚合完成后,sybr green染料与双链产物结合,定量pcr系统检测到荧光的净增量加大。

实验流程:细胞或组织rna提取-rna浓度检测-rna逆转录-定量pcr检测。

结果示例:





图 a 基因扩增曲线图;b 基因扩增溶解曲线图;c mrna相对表达量变化

从图中可以扩增曲线可以看出目的rna扩增效果,---怎么做,溶解曲线可以看出引物识别特---情况,通过使用δδct方法计算可以得到每个组中目的mrna表达变化。







str检测

短串联重复(short tandem repeats, str),又称微wei星dna(microsatellite dna)或简单重复序列(--- repeat sequence, srs或ssr),是广泛存在于原核生物和真核生物基因组中的核苷酸重复序列。有丝分裂过程中dna链之间的错配引起的fu制滑动被认为是导致str产生的较为常见原因,并且依据不同fu制单元大小的不同以及不同物种之间,fu制滑动发生的概率也不相同。

str是以---序列 (core repeat units) 首尾相连多次重复形成。每个str的---序列结构相同,南京pcr,长度为2-6bp,但其重复单位数目和重复区域的长度不同,因此str在不同种族、不同人群之间的分布具有差---,构成了str遗传多态性。不同个体之间在一个同源str位点的重复次数也不同,因而同指纹识别一样,str位点分析也可对个体进行身份识别。通过识别个体基因组在特定位点的特定序列重复,即可创建其基因档案。基于此,str分析法已经成为一种重要的鉴定分析方法,应用于---学、qin子鉴定及细胞鉴定等领域。






分子生物学服务

 公司建有100平米分子实验室,配备有pcr仪、定量pcr仪、电泳仪、恒温培养箱、恒温摇床、垂直电泳仪、蛋白转印仪、蛋白发光成像仪等设备。分子组---毕业于农业大学、华中科技大学同济医学院、浙江理工大学等高校生物医学相关,全部具有硕士研究生以上---,熟练掌握分子生物学相关实验,可开展多种分子生物学检测服务。







分子实验室部分设备



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