转录组测序
转录组即某个物种或特定细胞在某一功能状态下产生的rna的总和,是研究细胞表型和功能的一个重要手段。与基因组不同的是,转录组的定义中包含了时间和空间的限定。同一细胞在不同的生长时期及生长环境下,南京pcr,其基因表达情况是不相同的。转录组测序(rna-seq)是指利用第二代高通量测序技术进行cdna测序,快速地获取某一物种特定qi官或组织在某一状态下的转录本。相对于传统芯片而言,rna-seq无需预先设计探针,即可对物种的细胞类型的转录组进行检测,能够提供较的数字化信号,更高的检测通量以及更广泛的检测范围,是目前深入研究转录组复杂性的---工具。
二、大肠菌群检验方法:
由于大肠菌群指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的---,即:需氧及兼性厌氧、在37°c能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞。因此大肠菌群的检测一般都是按照它的定义进行。 目前国内采用的进出口食品大肠菌群检测方法主要有---和原商检局制订的行业标准。两个标准方法在检测程序上略有不同。
(一)---:---采用三步法,即:乳糖发酵试验、分离培养和证实试验。乳糖发酵试验:样品稀释后,选择三个稀释度,每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。36士1c培养48土2h,观察是否产气。分离培养:将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上,36士1°c培养18-24h,观察菌落形态。证实试验:挑取平板上的菌落,进行革兰氏染色观察。同时接种乳糖发酵管36士1°c培养24土2h,---怎么做,观察产气情况。
报告:
根据证实为大肠阳性的管数,查mpn表,报告每100ml ( g)大肠菌群的mpn值。具体操作参见gb4789. 3-94 <---------食品卫生微生物学检验大肠菌群测定>
(二)原商检局制订的行业标准,---,等效采用美国fda的标准方法,用于对出口食品中的大肠进行检测。本方法采用两步法:推测试验:样品稀释后,选择三个稀释度,每个稀释度接种三管lst肉汤。36士1c培养48士2h,观察是否产气。证实试验:将产气管培养物接种煌绿乳糖胆盐(bglb)肉汤管中,36士1°c培养48士2h,观察是否产气。以bglb产气为阳性。查mpn表,报告每ml(g)样品中大肠菌群的mpn值。具体操作参见sn0169-92<------进出口商品检验行业标准 出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠检验方法>
rip
技术概述
rip是研究体内蛋白与rna互作的重要技术。该技术先用甲醛等试剂交联细胞内的“蛋白-rna”互作复合物,裂解细胞后,用靶蛋白特异的抗l体(或标签抗l体)做免l疫沉淀,获得“靶蛋白-rna”互作复合物,去交联分离其中的rna;针对预测的靶蛋白结合rna的序列设计引物,pcr,
做qpcr实验,验证预测的rna是否与靶蛋白有结合,或者将分离出来的rna做高通量测序,筛选到可能与靶蛋白结合的rna。
技术流程
细胞交联-***细胞裂解-***免l疫共沉淀***去交联***rna分离***建库***高通量测序(或qpcr)。
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