干细bao培养---分化
干细bao是一类具有自我更新、高度增殖和多项分化潜能的细胞,理论上具有分裂能力,在特定条件下,可分化成特定组织。通常改变抑制 es 细胞不分化状态的培养条件, es 细胞就可以分化成多种细胞类型。es 细胞具有的这种能力在体外增殖并保持未分化状态及其多向分化潜能的生物学特性,使其广泛应用于生物学研究的各个领域, 它的潜在医学应用价值已成为范围内研究的---。目前,已---的自es细胞---分化的细胞主要包括胰岛细胞、造血细胞、肝细胞、神经细胞、脂肪细胞、心肌细胞、内皮细胞、上皮细胞、成骨细胞、软gu细胞和黑素细胞等。
细胞培养中常见的污染及解决方法
原生动物污染
原生动物污染后,细胞培养基变得轻微浑浊。在显微镜下,大量的小点来回移动。虽然此时细胞仍能生长,但繁殖速度减慢,细胞生长状态不好,边缘不清,细胞实验外包,变得不透明。原生动物与细胞形成共生关系。同时,原生动物与细胞竞争营养。这种共生现象非常普遍,但以细胞为主,因为原生动物的数量相对较少,因而对细胞的正常生长没有影响,只有当它们达到一定数量时,细胞实验外包选,才终---成为循环。
解决方法:原生动物污染的原因有很多,如液体消毒问题、操作问题、环境问题等,如果细胞足够,果断丢弃被污染的细胞和复苏细胞。如果要保留,需要购买使用相关的灭菌试剂。
细胞传代培养
操作步骤
1.将长满细胞的培养瓶中原来的培养液弃去。
2、加入0.5- -1ml 0.25%胰酶溶液,使瓶底细胞都浸入溶液中。
3、瓶口塞好橡皮塞,放在倒置镜下观察细胞。随着时间的推移,原贴壁的细胞逐渐趋于圆形,在还未漂起时将胰酶弃去,加入10m培养液终止---。观察---也可以用肉眼,当见到瓶底发白并出现细zhen孔空隙时终止---。一般室温---时间约为1- -3分钟。
4、用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液,细胞实验,分到另外两到三瓶中,细胞实验外包费用,实践培养液塞好橡皮塞,置37°c下继续培养。第二天观察贴壁生长情况。
附:---液配制方法:
称取0.25克胰酶蛋白酶(活力为1 : 250), 加入100ml无ca2+、mg2+的hanks液溶解,滤器过滤chu菌,4°c保存,用前可在379c下回温。胰酶溶液中也可加入edta,使zui终浓度达0.02%。
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