重庆细胞-英瀚斯生物科技公司-单细胞测序

2、快速脂质体转染法操作步骤如下 [方法二]：

(1) 以 5×105 细胞/孔接种 6 孔板 (或 35 mm 培养皿) 培养 24 小时，使其达到 50～60% 板底面积。

(2) 在试管中配制 dna/脂质体复合物方法如下：

在 1 ml 无 dmem 中稀释 psv2-neo 质粒 dna 或供体 dna。

旋转 1 秒钟，再加入脂质体悬液，旋转。

室温下放置 5～10 分钟，使 dna 结合在脂质体上。

(3) 弃去细胞中的旧液，重庆细胞，用 1 ml 无 dmem 洗细胞一次后弃去，单细胞测序，向每孔中直接加入 1 ml dna/脂质体复合物，37℃ 培养 3～5 小时。

(4) 再于每孔中加入 20%fcs 的 dmem，细胞实验，继续培养 14～24 小时，

(5) 吸出 dmem/dna/脂质体混合物加入新鲜 10%fcs 的 dmem，2 ml/孔，再培养 24～48 小时。

(6) 用细胞刮或---法收集细胞，以备分析鉴定。

3、稳定的脂质体转染方法如下：

(1) 接种细胞同前，细胞长至 50% 板底面积可用于转染。

(2)dna/脂质体复合物制备转染细胞同前 (2)、(3) 步骤。

(3) 在每孔中加入 1 ml、20%fcs 的 dmem，37℃ 培养 48 小时。

(4) 吸出 dmem，用 g418 选择培养液稀释细胞，使细胞生长一定时间，筛选转染，方法参照细胞筛选法进行。