二、大肠菌群检验方法:
由于大肠菌群指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的---，即:需氧及兼性厌氧、在37°c能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞。因此大肠菌群的检测一般都是按照它的定义进行。 目前国内采用的进出口食品大肠菌群检测方法主要有和原商检局制订的行业标准。两个标准方法在检测程序上略有不同。
(一):采用三步法，江西pcr，即:乳糖发酵试验、分离培养和证实试验。乳糖发酵试验:样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。36士1c培养48土2h，观察是否产气。分离培养:将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上，实时荧光定量pcr，36士1°c培养18-24h，观察菌落形态。证实试验:挑取平板上的菌落，进行革兰氏染色观察。同时接种乳糖发酵管36士1°c培养24土2h，观察产气情况。
报告:
根据证实为大肠阳性的管数，查mpn表，报告每100ml ( g)大肠菌群的mpn值。具体操作参见gb4789. 3-94 <------食品卫生微生物学检验大肠菌群测定>
(二)原商检局制订的行业标准，等效采用美国fda的标准方法，用于对出口食品中的大肠进行检测。本方法采用两步法：推测试验:样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管lst肉汤。36士1c培养48士2h，观察是否产气。证实试验:将产气管培养物接种煌绿乳糖胆盐(bglb)肉汤管中，36士1°c培养48士2h，观察是否产气。以bglb产气为阳性。查mpn表，报告每ml(g)样品中大肠菌群的mpn值。具体操作参见sn0169-92<------进出口商品检验行业标准 出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠检验方法>
rip
技术概述
rip是研究体内蛋白与rna互作的重要技术。该技术先用甲醛等试剂交联细胞内的“蛋白-rna”互作复合物，裂解细胞后，用靶蛋白特异的抗l体(或标签抗l体)做免l疫沉淀，---多少钱，获得“靶蛋白-rna”互作复合物，去交联分离其中的rna;针对预测的靶蛋白结合rna的序列设计引物，
做qpcr实验，验证预测的rna是否与靶蛋白有结合，或者将分离出来的rna做高通量测序，筛选到可能与靶蛋白结合的rna。
技术流程
细胞交联-***细胞裂解-***免l疫共沉淀***去交联***rna分离***建库***高通量测序(或qpcr)。
聚合酶链式反应(pcr)
操作步骤
1.在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
1qpcr buffer
5 μl
dntp mix( 2mm )
4 μl
引物1(10pm)
μl 2
引物2 ( 10pm)
2μl
taq酶(2u/ul)
1 μl
dna模板( 50ng-1μg/μl )
1 μl
加ddh2o至
μl 50
视pcr仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置pcr仪上执行扩增。-般:在93°c
预变性3-5min ，pcr实验室，进入循环扩增阶段: 93°c 40s***58°c 30s***72°c 60s ，循环30-35
次，后在72°c保温7min。
3.结束反应， pcr产物放置于4°c待电泳检测或-20°c长期保存。
4. pcr的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油，需用100ul进行抽提反应混合液，以
除去石蜡油;否则，直接取5- 10μl电泳检测。
实时荧光定量pcr-江西pcr-英瀚斯生物科技由南京英瀚斯生物科技有限公司提供。南京英瀚斯生物科技有限公司是江苏 南京 ,技术合作的见证者，多年来，公司贯彻执行科学管理、---发展、诚实守信的方针，满足客户需求。在英瀚斯---携全体员工热情欢迎---垂询洽谈，共创英瀚斯美好的未来。
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