二、大肠菌群检验方法:
由于大肠菌群指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的---,即:需氧及兼性厌氧、在37°c能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞。因此大肠菌群的检测一般都是按照它的定义进行。 目前国内采用的进出口食品大肠菌群检测方法主要有和原商检局制订的行业标准。两个标准方法在检测程序上略有不同。
(一):采用三步法,即:乳糖发酵试验、分离培养和证实试验。乳糖发酵试验:样品稀释后,选择三个稀释度,每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。36士1c培养48土2h,观察是否产气。分离培养:将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上,pcr,36士1°c培养18-24h,观察菌落形态。证实试验:挑取平板上的菌落,进行革兰氏染色观察。同时接种乳糖发酵管36士1°c培养24土2h,观察产气情况。
报告:
根据证实为大肠阳性的管数,查mpn表,报告每100ml ( g)大肠菌群的mpn值。具体操作参见gb4789. 3-94 <------食品卫生微生物学检验大肠菌群测定>
(二)原商检局制订的行业标准,等效采用美国fda的标准方法,---,用于对出口食品中的大肠进行检测。本方法采用两步法:推测试验:样品稀释后,选择三个稀释度,每个稀释度接种三管lst肉汤。36士1c培养48士2h,观察是否产气。证实试验:将产气管培养物接种煌绿乳糖胆盐(bglb)肉汤管中,36士1°c培养48士2h,观察是否产气。以bglb产气为阳性。查mpn表,报告每ml(g)样品中大肠菌群的mpn值。具体操作参见sn0169-92<------进出口商品检验行业标准 出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠检验方法>
聚合酶链式反应(pcr)
操作步骤
1.在冰浴中,---多少钱,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
1qpcr buffer
5 μl
dntp mix( 2mm )
4 μl
引物1(10pm)
μl 2
引物2 ( 10pm)
2μl
taq酶(2u/ul)
1 μl
dna模板( 50ng-1μg/μl )
1 μl
加ddh2o至
μl 50
视pcr仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置pcr仪上执行扩增。-般:在93°c
预变性3-5min ,进入循环扩增阶段: 93°c 40s***58°c 30s***72°c 60s ,循环30-35
次,后在72°c保温7min。
3.结束反应, pcr产物放置于4°c待电泳检测或-20°c长期保存。
4. pcr的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,实时定量pcr,需用100ul进行抽提反应混合液,以
除去石蜡油;否则,直接取5- 10μl电泳检测。
蛋白质质谱鉴定服务
蛋白质(protein)是有机大分子,是构成细胞的基本有机物和生命活动的主要承担者。蛋白质在催化生命体内各种反应进行、---、抵御外来物质入l侵及控制遗传信息等方面都起着重要的作用。蛋白质的一级结构是---酸序列,通过鉴定---酸序列来匹配它的蛋白质,这是定性研究,是蛋白质组学的基础,也是蛋白质组学的重要技术之一。
质谱一般由离子源、分析器(mass ---yzer)和离子检测器(detector)三部分组成。传统的质谱仅用于小分子挥发物质的分析,但随着新的离子化技术的出现,如基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(maldi-tof)和电喷雾电离质谱(esi-ms)等,质谱技术的出现为蛋白质分析提供了一种新的途径。现在蛋白质组学基本研究手段是:以生物质谱技术为,对蛋白质进行---、高通量分离、鉴定和分析。
蛋白质质谱鉴定的基本原理是用蛋白酶将蛋白质---成肽段混合物,经maildi或esi等软电离手段将其离子化,然后通过分析器将具有特定质核比的肽段离子分离开来。通过实际谱图和理论上蛋白质经过蛋白酶---后产生的一级质谱峰图和二级质谱峰图进行的比对,进行蛋白鉴定。
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