关于细胞培养的常见问题:
q: 细胞在培养过程中出现碎片如何处理？
a: 贴壁细胞在移除原培养液后，用 pbs 冲洗 2-3 遍；悬浮细胞离心移除原培养液后，加入 pbs 重悬，离心移除 pbs; 一般建议重复上述步骤 2-3 遍，用 800-1000rpm 离心 3-5 分钟。
q：细胞冻存能放在 -80℃ 保存吗？
a：长期保存的细胞应当放在液氮（-196℃）中保存，短时间（一般 1 周-2 周）可以存放在 -80℃。
q：培养瓶是用密封盖好，还是用透气盖好？
a：都可以。只是在使用密封盖培养瓶时，瓶盖旋至约 2/3，湖北细胞，不要完全拧紧，预留约 1/3 以便细胞可以透气；有些品牌的密封盖培养瓶的瓶盖上有适合位置指示标志。
q:何谓 fbs，fcs，细胞融合实验报告，cs，hs?
a: fetal bovine serum(fbs)和 fetal calf serum(fcs)之间没有区别，都是指胎牛；fcs 不是正规命名，尽量不使用。calf serum（cs）则是指小牛。horse serum(hs)则是指马。
q:中可能出现的沉淀物是什么？
a:基于多年的实验研究，用于细胞培养的胎牛以及其它中可能会存在以下种类的沉淀物：
（1）纤维蛋白，它是经常出现的较大的沉淀物，可以达到 1-2mm，可以用肉眼观察到。因为都是在低温下进行收集和快速处理的，一些纤维蛋白原（可溶性的形成絮状纤维蛋白的前体）在处理过程中仍然处于溶解状态，当经过的过滤分装后，基因编辑技术，就会在瓶中凝结出现纤维蛋白沉淀。
（2）磷酸钙，它也是常见的一种沉淀物，通常会使出现浑浊，并且在 37℃ 培养的时候会增加。这种沉淀物在倒置显微镜下观察像小黑点， 这些小黑点由于布朗运动看上去可以活动，因此经常被误认为是微生物污染。
（3）胆固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白质。他们也是中出现沉淀物的常见原因。
脂质体瞬时转染
1、细胞h9c2 (hela) 6孔板hela1x10°/孔。
2、转染前换上没有抗sheng素的dmem+胎清(10%)。
3、将质粒dna (约2-4ul) 2ul 加入dorf管中+dmem至50u1。
4、脂质体5ul补培养基至50ul混匀静止5分钟(质粒与脂质体比例为1:2或1.5:2.5)。
5、将含有脂质体的培养基与含质粒的混合总体积100ul室温放置30分钟。
6、吸取混合物均匀加入每一个孔中。
7、将6孔板放入培养箱中继续培养6小时后吸出培养基换上新配置的培养基dmem6ml+胎清600u1+三抗300u1。
8、培养24小时。
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