22.同样的od用page检测,eb染色为什么深浅不一?
答:通常可以用eb染色的方法来判断双链dna的量(如质粒dna),因为eb可以嵌合到双链dna中。而合成的单链dna,由于碱基组成不同,形成二级结构的可能性不同,eb的染色程度也会有差异,比如oligo(dt)等不形成二级结构,eb染色效果就非常差。所以不要用eb染色的方法来定量,实时荧光定量pcr,而用紫外分光光度计检测。同样道理,用eb染色来照片不适合所有引物。
23.引物不纯会有什么后果?
答:引物不纯可能会导致:1)非特---扩增;2)无法用预先设计在引物5′端酶切位点的酶切开,---是没有保护碱基的引物;3) 用于测序出现双峰或乱峰。解决办法重新合成或重新纯化。
24.已经溶解的引物,为什么原先使用正常,而过一段时间再使用就不好了?
答:如果溶解引物的水ph过低或污染了菌或---酶,会使引物降解。使用时没有充分解冻混合,液体不均匀也可能会造成引物加入量不准确。建议分装引物,fish检测,避免反复冻溶。建议使用10mmt ris ph7.5缓冲液溶解引物,因为有些蒸馏水的ph值比较低(ph4-5), 引物在这种条件下不稳定。还有一种可能性是引物没有问题,而是pcr使用材料---是模板的与先前使用的不完全一致。
分子生物学检测服务
随着生命科学和化学的不断发展,人们对生物体的认知已经逐渐深入到微观水平。从单个的生物体到qi官到组织到细胞,再从细胞结构到---和蛋白的分子水平,人们意识到可以通过检测分子水平的线性结构(如---序列),来横向比较不同物种,同物种不同个体,同个体不同细胞或不同生理(病理)状态的差异。这就为生物学和医学的各个领域提供了技术平台。分子生物学检测技术是现代分子生物学与分子遗传学取得进步的结晶,是在人们对基因的结构以及基因的表达和调控等生命本---题的认识日益加深的基础上产生的。近年来,分子生物学检测技术的方法学研究取得了进展,先后建立了各种分子生物学检测技术。
动物组织细胞基因组dna提取
操作步骤
1. 取新鲜或冰冻动物组织块0.1g(0.5cm3),尽量剪碎。置于玻璃匀浆器中,加入1ml的细胞裂解缓冲液匀浆至不见组织块,转入1.5ml 离心管中,加入蛋白酶k
(500ug/ml)20μl,混匀。在65℃恒温水浴锅中水浴30min,也可转入37℃水浴12~24h,扬州pcr,间歇振荡离心管数次。于台式离心机以12000 rpm离心5min,取上清液入另
一离心管中。
2.加2倍体积异,倒转混匀后,可以看见丝状物,用100ul 吸头挑出,凉干,用200ul te 重新溶解。(可进行pcr反应等,需要进一步纯化的按下列步骤进行)
3.加等量的酚??振荡混匀,离心12000 rpm,5min。
4.取上层溶液至另一管,加入等体积的?,振荡混匀,离心12000 rpm,5min。
5. 取上层溶液至另一管,加入1/2体积的7.5mol/l氨加入2倍体积的无水---,混匀后室温沉淀2min ,离心12000 rpm ,10min。
6.小心倒掉上清液,将离心管倒置于吸水纸上,将附于管壁的残余液滴除掉。
7.用1ml 70%---洗涤沉淀物1次,离心12000 rpm , 5min。
8.小心倒掉上清液,---怎么做,将离心管倒置于吸水纸上,将附于管壁的残余液滴除掉,室温干燥。
9.加200ul te重新溶解沉淀物,然后置于4℃或?c20℃保存备用。
10.吸取适量样品于genequant上检测浓度和纯度。
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