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9.如何计算引物的tm值？

答：引物设计软件都可以给出tm，与引物长度、碱基组成、引物使用缓冲的离子强度有关。

长度为25mer以下的引物，tm计算公式为：

tm =            4℃   (g + c)+ 2℃   (a + t)

对于更长的寡聚核苷酸，tm计算公式为：

tm = 81.5 + 16.6 x log10[na+] + 0.41 (%gc) - 600/size

公式中，size = 引物长度。

tm的定义：tm = temperature at which 50% of a given oligonucleotide is hybridized to its complementary strand. in the absence of destabilizing agents， like formamide/urea， tm will depend on 3 major parameters: the sequence: a gc-rich sequence has a higher melting temperature. the strand concentration: high oligonucleotide concentrati favor hybrid formation， which results in a higher melting temperature. the salt concentration: high ionic strength results in a higher tm as cati stabilize the dna duplexes.

染色质免l疫共沉淀技术(chip)

基于体内分析而发展的染色质免l疫沉淀分析chr omat in immunoprecipitat ionassay kit， chip)技术可以真实、完整地反映结合在dna序列上的调控蛋白。由于chip采用甲醛固定活l细胞或者组织的方法，---怎么做，因此能比较真实的反映细胞内tf与promoter的结合情况，---多少钱，还可以用来研究组蛋白的各种共价修饰与基因表达的关系。近年来，这种技术得到不断的发展和完善。采用结合微阵列技术在染色体基因表达调控区域检查染色体活性，实时荧光定量pcr，是深入分析癌l症、心血l管病以及中央神经系统紊乱等---主要通路的一-种非常有效的工具。

染色质免l疫沉淀分析(chip) 的基本原理是在活l细胞状态下，当用甲醛处理时，相互靠近的蛋白与蛋白、蛋白与---(dna或rna)之间会产生共价键。细胞内，当f与promoter相互结合时，安康pcr，它们必然靠的比较近或者契合在一起，这个时候用甲醛处理，能使它们之间产生共价键。固定的蛋白质dna复合物通过超声或酶处理将其随机切断为-定长度范围内的染色质小片段然后通过抗原抗l体的特---识别反应沉淀此复合体，特---地富集目的蛋白结合的dnal片段，通过对目的片断的纯化与检测，从而获得蛋白质与dna相互作用的信息。通过qpcr或二代测序，筛选与目的蛋白互作的未知dna信息。