注意事项
1. 针头大小与动物的种类有关,t 同时针头一定要磨钝。
2. 检查灌注泵的运作情况,一定排出管子的气泡和空气,防止空气栓塞。
3. 经腹腔暴腔,先清楚升主动脉外面的脂肪组织和心外膜组织。
4. 将针头经左心室插入升主动脉(颜色变白的哦),并用钳子固定。
5. 解开右心耳,同时开启灌注泵。注意,不要---揭开---的其他部位,否则有时候可能会灌注成功但是绝大部分会造成灌注不成功,尤其。
6. 将 4 度的生理盐水(好已动物的发白为标准,我们实验室的大鼠约用 250ml)和--- (根据所取得材料而定) 依次灌入。
7. 整个过程均应将动物放在冰上,以便于---地保存目的蛋白和酶的活性。
6. 八臂迷宫实验方法根据实验目的的不同迷宫臂的数目可不同,包括8、16、24、32、40和48臂迷宫。迷宫臂越少要求动物记住探究过的臂也越小,动物的行为操作就越简单。增加臂的数目一方面增加了对动物空间记忆的要求,另一方面也引入了更多的、有---考虑的干扰因素(例如过去的迷宫学习对目前所测记忆的影响)。所以,通常使用8臂迷宫,既可减少不---的、过多臂的干扰,又可缩短训练和测试所花的时间。
7. 所用食物通常为小块的、带巧克力味(动物喜欢的味道之一)或甜味的早餐圈(每块10mg);也可用液体食物(如巧克力奶或水)。后者对于测试某些影响动物对固体食物吞咽的尤为实用。
8. 影响动物迷宫操作主要有两大因素:对迷宫或观察者的恐惧与动物探究习性和已知放在迷宫臂内食物的驱使。恐惧因素过强会阻止动物的迷宫操作,使动物始终停留在迷宫的某一个地方而不去探究。缺乏对食物的渴求也会产生类似结果,增加对动物的抚摸,---时加高迷宫臂的侧墙,有助于减少动物的恐惧。如食物的驱使作用不足,可减少食物量,但必须同时监测体重和一般身体状况。通常大鼠体重不应低于禁食前的80%;对多数大鼠,体重降低15%即可。
9. 与水迷宫不同,动物模型构建,臂迷宫适合反复测试或长期记忆的测试。一般认为,工作记忆代表短期记忆,甘孜动物模型,参考记忆代表长期记忆。
难点与关键点
将灌注针插入主动脉内是灌注固定的关键,也是难点。首先准确找到主动脉,基因敲除小鼠,这是此步骤的要点。可用温生理盐水将胸腔内的---冲洗干净,用镊子轻轻夹住心 外膜(夹的越少越好,以免影响取材)将---向左上方提起,即可看清主动脉,又可使灌注针很容易地插入主动脉内。插入时动作要慢,针尖方向不要偏向右侧,以 免刺入右心房,如果感到有阻力,则将针退后、调整方向重新进针,直到进入主动脉,灌注针进入主动脉后可在---的上方看到其位置,灌注针进入主动脉的长度 好为 3~5 毫米,然后用丝线扎紧。切勿将灌注针放在左心室内,这样由于主动脉瓣的关闭,灌注液很难进入主动脉,而是沿着心室的切口流出,致使灌注失败。另 外,灌注针插入成功后,动物模型购买,一定要用剪刀剪开右心耳而不是右心室,这是灌流液的出口。剪开心尖的位置一定要掌握好,不能偏右使灌注针插入右心室。
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