病理实验外包,南京英瀚斯可开展冰冻切片荧光染色1. 冰冻切片室温晾干15 min,可用含10%正常山羊的pbs室温封闭切片1小时(此步可不洗)。2. 滴加适当比例稀释的一抗或一抗工作液(的量视组织大小而定,原则是可以均匀覆盖组织面,且---整个过程中不会使组织干涸)。3. 将切片放在加了pbs的组化湿盒,室温孵育2小时或4℃过夜。4. 第二天先将湿盒放到37℃回温1 h,然后吸取片上的一抗进行回收,将切片插入到小染缸pbs冲洗。5. 滴加用pbs稀释好的二抗(避光)置于分子杂交箱中37℃孵育1小时。回收二抗,切片置于染缸内,pbs洗5 min×3次。6. 滴加dapi工作液染核,室温10~20 min(工作浓度0.1%染色15 min)。7. 回收dapi,滴加5-10 μl 抗荧光衰减封或中性树胶,用处理干净的盖玻片封片,即可到荧光显微镜或者共---显微镜下。8. 做好的片放在切片盒内,置于4℃冰箱,可保存一周左右。
病理实验外包,样品保存和寄送注意事项一、取材注意事项1. 取材动作要迅速,不宜作太久的拖延以免组织细胞的成分、结构等发生变化。2. 切片材料应根据需要观察的部位进行选择,尽可能不要损伤所需要的部分。二、固定注意事项1. 一般固定液,都以新配为好,配好后应贮存在阴凉处,ttc染色,不宜放在日光下,以免引起化学变化,失去固定作用。2. 有些混合固定液的成份之间会发生氧化还原作用,alp染色,一定要在使用前才混合,如果混合太早,固定时就没有作用了。3. 固定材料时,固定液必须充足,一般为材料块的20~30倍,有些水分多的材料,中间应更换1~2次新液。4. 材料固定完毕后,保存于严密紧塞或加盖的容器里,同时在容器外上标签,并随同材料在溶液中投入相应的标签,以免相互混淆。标签上注明固定液、材料来源、日期等。标签上的文字,应用黑色铅笔或绘图黑墨水书写。
病理实验外包,病理染色切片常见问题及解决方法:1.切片碎烂或组织脱出并与石蜡分离
●原因:组织脱水,tunel染色,透明不够。浸蜡时间过长、浸蜡温度过高。组织脱出是由于脱水、透明时间不够,或组织中含有---等,石蜡不易渗入组织中故导致石蜡与组织分离。二使用时间过久。
●解决方法:必须按组织大小厚薄选择脱水、透明时间。依组织的性质和结构特点确定浸蜡时间、控制包埋温度。一般这种情况难以补救。脱水,山东染色,透明渗蜡不够,应重新熔化,退回入二和酒精,再进行渗蜡包埋。更换二。
2.切片皱褶太多且不能完全展开
●原因:石蜡太软或室温过高。切片刀上粘有残余的石蜡,刀口不干净。组织浸蜡时间不够或脱水、透明不够。切片刀不锋利。
●解决方法:可将蜡块放入冰箱中冰冻后切片。并在切片时一边切片一边用冰块冰冻或换蜡。如室温过高,可开空调降低室温。切片刀不干净,可用棉花沾少许二将刀口拭干净。组织浸蜡不够,可重复浸蜡过程。将切片刀磨锐利再行切片。南京英瀚斯,病理染色实验服务平台。
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