腺---包装原理介绍
腺---是一种没有包膜的直径为79-90nm的颗粒，由252个 壳粒呈二十面体排列构成。每个壳粒的直径为7-9nm。衣壳里是线状双链dna分子，两端各有长约100bp的反向重复序列。人体腺--- 已知有33种，分别命名为ad1-ad33，研究详细得是ad2.
腺---是一种无包膜的球型结构的---，遗传物质为线型 双股dna形式。腺---的特点：（1）gan染范围广对人致病性低；（2）对增殖和非增殖细胞均具有gan染性；（3）能有效进行增殖；（ 4）---滴度高；（5）不整合到染色体中，无插入致突变性；(6)外源基因装载容量大。由于腺---的这些特点使其广泛地应用于体 外基因转导、体内接种yi苗、和基因zhi疗等各个领域。
实验方法
1.获得目的基因序列；
2.构建---表达载体质粒；
3.表达载体质粒和包装质粒重组；
4.gan染hek293，包装出---；
5.---扩增、浓缩；
6.滴度测定。
rna提取及注意事项
研究基因的表达和调控时，需要从组织或细胞中分离纯化rna。rna的高低经常影响rt-pcr、cdna库构建和northern blot等分子生物学实验的成败。
主要试剂
trizol是一种新型总rna抽提试剂，---怎么做，内含异---胍等物质，能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出的---酶。
1.
trizol试剂含有，具有毒性和---性，注重操作。
2.
rnase污染的主要来源是操作过程中手和空气中的浮沉，注重配带手套，样品尽可能盖严。
3. 细胞裂解必需充分且操作迅速。裂解不完全会降低后得率，因为一部分rna会残留在未裂解的细胞中。细胞裂解之后要看不见颗粒状物质（结缔组织和骨除外）。在清洗和裂解细胞时在低温下操作，防止在操作过程中释放的内源rnase降解了rna。
4. 酵母和一些---由于细胞壁的---结构，---，可以加入trizol试剂同时加入无rnase的玻璃珠并剧烈振荡，使细胞裂解充分。
2-8℃ 避光保存一年。
聚合酶链式反应(pcr)
操作步骤
1.在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
1qpcr buffer
5 μl
dntp mix( 2mm )
4 μl
引物1(10pm)
μl 2
引物2 ( 10pm)
2μl
taq酶(2u/ul)
1 μl
dna模板( 50ng-1μg/μl )
1 μl
加ddh2o至
μl 50
视pcr仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，荧光定量pcr，立即置pcr仪上执行扩增。-般:在93°c
预变性3-5min ，遂宁pcr，进入循环扩增阶段: 93°c 40s***58°c 30s***72°c 60s ，循环30-35
次，后在72°c保温7min。
3.结束反应， pcr产物放置于4°c待电泳检测或-20°c长期保存。
4. pcr的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油，需用100ul进行抽提反应混合液，以
除去石蜡油;否则，直接取5- 10μl电泳检测。
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