大鼠主动脉内皮细胞的分离培养
方法:分离大鼠主动脉,细胞实验外包选,直接贴壁于培养皿中,荧光倒置显微镜观察细胞形态,免yi组化ⅷ因子相关抗原染色鉴定细胞.结果:约24小时组织块边缘有游离的 新生细胞长出,7天即融合成片.---传代后细胞呈短梭形或三角形,单层生长,铺路石状,ⅷ因子表达阳性,呈指数增殖.冻存后复苏细胞活性均超过90%.结 论:用贴壁法成功建立了大鼠血管内皮细胞体外培养方法,冻存细胞存活率高,为体外研究提供了稳定的模型.
q:中的沉淀物对细胞培养有什么影响?
a:(1)细胞生长,我们的试验以及经验表明沉淀物不会影响细胞培养,我们的客户以及其它生产商也证明了这一点。
(2)过滤,如果中出现大量的沉淀物,将很难过滤。一般说来,因为在生产工序中已经过 100nm 或者 40nm 的过滤处理,并且经过了严格的无菌检测,巴中细胞实验,因此不再过滤用于细胞培养 的。在实验室中没有---再过滤处理,在---的细胞培养中往往将直接加到培养基中一起 过滤。
(3)污染,磷酸钙往往被误认为微生物污染而引起。研究者可能会在中观察到一些絮状的 沉淀,因此就会比较警觉的去做无菌试验,将放在培养箱中培养几天,结果可能会观察到更多的絮状 沉淀,细胞实验外包,因此就断定被污染了。并且当研究者将样品放在倒置显微镜下观察时往往可以看到一些可 以运动的小黑点,因此就确认是被污染了。于是,研究者就会花费更多的时间和精力来和生产商 确认,但终确定没有被污染而只是沉淀。为了避免这些问题的发生,我们建议不要直接将放在 培养箱中培养观察是否有菌,而是将加到琼脂板上进行培养以观察是否有---生长。另外,也可以进 行革兰氏染色,在油镜下观察,以确认是否有污染。
细胞培养中常见的生物污染包括---污染、霉菌污染、支原体污染、黑点污染、---污染和原生动物污染。这些污染在细胞培养中的特点及相应的解决办法如下:
1.---污染
---在普通倒置显微镜下呈黑色和细砂状。根据gan染菌的种类不同,可能会呈现不同的形状,培养液一般会变得浑浊、黄色,对细胞生长有明显影响。
解决方法:仔细检查器具的灭菌情况,---通风时间和高压灭菌器的压力是否足够。重要的是,与培养基接触的移液管等物品如果被污染两次,则可能会导致储存溶液也受到污染。所以一定要注意!下次使用前要检查培养基的浑浊度。此外,建议在培养基中添加抗生su。
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