动物组织细胞基因组dna提取
操作步骤
1. 取新鲜或冰冻动物组织块0.1g(0.5cm3),尽量剪碎。置于玻璃匀浆器中,加入1ml的细胞裂解缓冲液匀浆至不见组织块,转入1.5ml 离心管中,加入蛋白酶k
(500ug/ml)20μl,混匀。在65℃恒温水浴锅中水浴30min,也可转入37℃水浴12~24h,间歇振荡离心管数次。于台式离心机以12000 rpm离心5min,取上清液入另
一离心管中。
2.加2倍体积异,倒转混匀后,可以看见丝状物,河南pcr,用100ul 吸头挑出,凉干,用200ul te 重新溶解。(可进行pcr反应等,需要进一步纯化的按下列步骤进行)
3.加等量的酚??振荡混匀,离心12000 rpm,5min。
4.取上层溶液至另一管,加入等体积的?,振荡混匀,离心12000 rpm,5min。
5. 取上层溶液至另一管,加入1/2体积的7.5mol/l氨加入2倍体积的无水---,pcr实验室,混匀后室温沉淀2min ,离心12000 rpm ,10min。
6.小心倒掉上清液,将离心管倒置于吸水纸上,将附于管壁的残余液滴除掉。
7.用1ml 70%---洗涤沉淀物1次,离心12000 rpm , 5min。
8.小心倒掉上清液,fish检测,将离心管倒置于吸水纸上,pcr,将附于管壁的残余液滴除掉,室温干燥。
9.加200ul te重新溶解沉淀物,然后置于4℃或?c20℃保存备用。
10.吸取适量样品于genequant上检测浓度和纯度。
分子生物学检测
分子生物学作为现代生物技术中zui为---的实验手段之一,已经广泛渗透到生命科学的各个领域,在基础研究、医l疗诊断等领域均起到了非常重要的作用。
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高l效液相色谱法检验方法
高l效液相色谱法是一种现代液体色谱法,其基本方法是将具一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液作为流动相,用高压输液泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱,注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后,各成分先后进入检测器,用记录仪或数据处理装置记录色谱图或进行数据处理,得到测定结果。由于应用各种性质的微粒填料和加压的液体流动相,本法具有分离---,分析速度快的特点。
高l效液相色谱法适用于能在特定填充剂的色谱柱上进行分离的
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