pcr-南京英瀚斯生物科技-实时荧光定量pcr

蛋白提取

大部分蛋白质都可溶于水、稀盐、稀酸或碱溶液， 少数与脂类结合的蛋白质则溶于---、---等有ji溶剂中，因些，可 采用不同溶剂提取分离和纯化蛋白质及酶。

(一)水溶液提取法

稀盐和缓冲系统的水溶液对蛋白质稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质常用的溶剂，通常用量是原材料体积的1-5倍，pcr，提取时需要均匀的搅拌，pcr，以利于蛋白质的溶解。提取的温度要视有效成份性质而定。一方面，多数蛋白质的溶解度随着温度的升高而增大，因此，温度---于溶 解，pcr实验室，缩短提取时间。但另一方面. ，温度升高会使蛋白---性失活，因此，实时荧光定量pcr，基于这一点考虑提取蛋白质和酶时一般采用低温( 5度以下)操作。为了避免蛋白质提以过程中的降解，可加入蛋白 水解酶抑zhi剂(如二yi------，碘yi酸等)。

通常活性氧阳性对照在---细胞20-30分钟后可以---提高活性氧水平。

收集细胞后装载探针：按照1：1000用无培养液稀释dcfh-da，使终浓度为10微摩尔/升。细胞收集后悬浮于稀释好的dcfh-da中，细胞浓度为一百万至二千万/毫升，37℃细胞培养箱内孵育20分钟。每隔3-5分钟颠倒混匀一下，使探针和细胞充分接触。用无细胞培养液洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的dcfh-da。直接用活性氧阳性对照及自己感兴趣的---细胞，或把细胞等分成若干份后---细胞。通常活性氧阳性对照在---细胞20-30分钟后可以---提高活性氧水平。

2.、检测

对于原位装载探针的样品可以用激光共---显微镜直接观察，或收集细胞后用荧光分光光度计、荧光或流式细胞仪检测。

对于收集细胞后装载探针的样品可以用荧光分光光度计、荧光或流式细胞仪检测，用激光共---显微镜直接观察也可以。