细胞培养中常见的污染及解决方法
支原体污染
支原体是隐蔽的污染物，不能通过过滤去除。显微镜下没有任何可见的支原体污染迹象，比如细胞病变和浊度或 ph 值变化（即使在---污染的培养基中），这样就会导致我们产生错误的---。而在牛中，支原体是常见的微生物之一。
解决方法：通常的过滤灭菌方法对支原体没有影响。细胞一旦被支原体污染，细胞实验外包公司，---是对重要的细胞系，必须去除支原体，一般的方法有、抗和抗与补体联合。值得注意的是，支原体很---的结构特征是没有细胞壁。因此，它对作用于细胞壁的生物合成（如 β-内---类、万古等）完全不敏感，并且通常对多粘菌素、---和类具有耐药性。相反，细胞实验外包选，四环素类和大环内酯类对支原体的抑制作用很强，而---糖苷类和氯的抑制作用较弱。
大鼠gu髓间充质gan细胞的分离
操作方法
(1 )取sd大鼠( 2周龄)，颈椎脱臼法处死后立即用75%---浸泡，移入超净工作台内，用大头针固定大鼠四肢于工作台面的泡沫板上。
(2)碘酒擦拭四肢，再用酒精棉球擦拭，无菌条件下用灭菌消毒后的镊子和剪刀分离出大鼠股骨和胫骨，剔除骨头表面肌肉， pbs溶液冲洗两遍。
(3 )从中间剪断股骨和胫骨，用2ml无菌注she器吸取dmem/f 12溶液冲出gu髓细胞多次，再用针头吹打，吸管吸入离心管内，1000r/min离心5min，弃上清，用pbs重悬细胞。
(4 )缓慢将细胞悬液加入预先装有5ml淋巴细胞分离液的15ml离心管内，保持细胞悬液在淋巴细胞分离液上层，注意不要搅动液面，保持二者分层界面。
(5 ) 2000rpm离心15-25min，离心后溶液分4层，吸取中间骨sui基质细胞层(白色浑浊状)，细胞实验外包， pbs洗三次。
(6)用含15%胎牛xue清及青链mei素的dmem/f 12以106/ml的细胞浓度接种于25cm2培养瓶中， 置37°c、5%co2恒温培养箱中培养。
( 7 ) 24小时后弃去培养液(看细胞贴壁情况)，pbs冲洗2-3次去除末贴壁细胞，加入培养液继续培养。以后每3d半量换液1次，-般10d细胞生长融合。
(8 )经0.25%胰酶---，1 : 2传代，其后一般3-5d传代1次，选取生长---的第三代细胞进行后续实验。
cell counting kit-8（简称cck-8）是一种基于wst-8的广泛应用于---和细胞毒性的检测试剂。wst-8化学名：2-(2-甲氧ji-4-硝ji---ji)-3-(4-硝ji---ji)-5-(2，4-二磺酸---)-2h-四唑单钠盐，是一种类似于mtt的化合物，它在电子载体1-甲氧ji-5-甲ji吩---鎓---二jia酯（1-methoxy pms）存在的情况下，细胞实验，被线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的橙黄色甲瓒产物（formazan）。---越多越快，颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅，对于同样的细胞，颜色的深浅与活xi胞的数量成正比，因此可利用这一特性直接进行---和毒性分析。
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