pcr检测-英瀚斯-安徽pcr

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    2023-7-11

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分子生物学检测

分子生物学作为现代生物技术中zui为---的实验手段之一,已经广泛渗透到生命科学的各个领域,实时荧光定量pcr,在基础研究、医l疗诊断等领域均起到了非常重要的作用。

     借助的技术优势,英瀚斯生物特配备了高l效的仪器设备,如slan 48p 荧光定量pcr检测系统、pcr仪、电泳仪、冷冻离心机、高速离心机等。目前公司可为您提供反转录pcr、荧光定量pcr、凝胶电泳迁移率等检测服务,荧光定量pcr,---缩短您的实验周期、降低您的实验成本。











甲l基化特---的pcr

herman 等( 1996 )在使用重---酸盐处理的基础上新建的一种方法。该方法敏感性高,主要用于作定性研究。用------盐处理基因组dna,所有未发生jia基化的胞嘧定被转化为尿嘧ding,而jia基化的胞嘧定不变;随后设计针对jia基化和非jia基化序列的引物进行pcr。通过电泳检测msp扩增产物,如果用针对处理后jia基化dna链的引物能得到扩增片段,则说明该位点存在jia基化;反之,说明被检测的位点不存在jia基化。

特点:适用范围广,能够检测特异位点是否发生jia基化。

------盐测序法(bisulfite sequencing pcr,bsp)

------盐修饰后测序法( bsp ) frommer 等( 1992 )提出的研究 dna jia基化方法,此方法---性及jing确度高,能明确目的片段中每一个 cpg 位点的jia基化状态。用------盐处理基因组dna,所有未发生jia基化的胞嘧ding被转化为尿嘧ding,而jia基化的胞嘧ding不变。随后设计bsp引物进行pcr,在扩增过程中尿嘧定全部转化为胸腺嘧定,zui后对pcr产物进行测序就可以判断cpg位点是否发生jia基化,称为bsp-直接测序法。将pcr产物克long至载体后进行测序,可以提高测序成功率,这种方法称为bsp-ke隆测序法。

特点:jing确度高,能够准确检测出jia基化的程度百分比。








分子实验介绍——荧光定量pcr检测

荧光定量pcr是检测生物样品中rna含量的普遍的方法,通过荧光染料或荧光标记的特---的探针,对pcr产物进行标记---,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析,pcr检测,计算待测样品模板的初始浓度。目前主要使用sybr green和taqman法对rna含量进行检测。sybr green在低样本量时成本较低,目前选用的较多。

sybr green i是一种只与dna双链结合的荧光染料。当它与dna双链结合时,发出荧光;从dna双链上释放出来时,安徽pcr,荧光信号急剧减弱。因此,在一个体系内,其信号强度代表了双链dna分子的数量。sybr green荧光染料法定量pcr的基本过程是:1、开始反应,当sybr green染料与dna双链结合时发出荧光。2、dna变性时,sybr green染料释放出来,荧光急剧减少。3、在聚合延伸过程中,引物退火并形成pcr产物。4、聚合完成后,sybr green染料与双链产物结合,定量pcr系统检测到荧光的净增量加大。

实验流程:细胞或组织rna提取-rna浓度检测-rna逆转录-定量pcr检测。

结果示例:






图 a 基因扩增曲线图;b 基因扩增溶解曲线图;c mrna相对表达量变化

从图中可以扩增曲线可以看出目的rna扩增效果,溶解曲线可以看出引物识别特---情况,通过使用δδct方法计算可以得到每个组中目的mrna表达变化。


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