细胞培养中常见的污染及解决方法
黑点污染
黑色的游动点能穿透滤膜并在空气中扩散。它们在低倍镜下显示为黑色圆点,在高倍镜下显示为可移动的黑点。培养液也不浑浊,一般影响较小,因此细胞仍可使用。通常,黑点污染后,细胞生长---,运动物体无明显增加,培养基的颜色和透明度无明显变化。在同一批培养的细胞中也可以发现类似的现象。
解决方法:黑点对细胞生长状态没有明显影响,---后会自然消失,因此除了置换外,无需特殊处理。如果细胞可能被小的运动点污染,建议增加培养皿细胞密度,汉中细胞,以提高细胞存活率。
关于细胞冻存的注意事项:
1. 为保持细胞大存活率,一般都采用慢冻存融的方法。
2. 冻存物距液氮面越近温度越低。标准的低冻速度为-1℃~12℃/ 分钟,当温度下降达-25℃时,细胞培养,下降速度可增至-5~-10℃/ 分钟,到-100℃时则可迅速冻入液氮中。因此要适当掌握冻存物下降入液氮中的速度,过快能影响细胞内水分透出,太慢则促冰晶形成。
3. 初次冻存者在下降冻存时,宜先用细木棒伸入罐中探测液面位置,然后需用温度计与冻存物并行的办法,以观测下降冻存物的速度、冻存物与液氮液面距离和温度三者关系,细胞培养技术,当已掌握以上各参数和冻存技术熟练后,细胞毒性实验,仅按下降时间和下降距离便可获理想冻存效果。
细胞培养中常见的污染及解决方法
支原体污染
支原体是隐蔽的污染物,不能通过过滤去除。显微镜下没有任何可见的支原体污染迹象,比如细胞病变和浊度或 ph 值变化(即使在---污染的培养基中),这样就会导致我们产生错误的---。而在牛中,支原体是常见的微生物之一。
解决方法:通常的过滤灭菌方法对支原体没有影响。细胞一旦被支原体污染,---是对重要的细胞系,必须去除支原体,一般的方法有、抗和抗与补体联合。值得注意的是,支原体很---的结构特征是没有细胞壁。因此,它对作用于细胞壁的生物合成(如 β-内---类、万古等)完全不敏感,并且通常对多粘菌素、---和类具有耐药性。相反,四环素类和大环内酯类对支原体的抑制作用很强,而---糖苷类和氯的抑制作用较弱。
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