microrna芯片:
rna干扰(rna interference， rnai)现象是一种进化上保守的抵御或外来---qin犯的防御机制。将含有靶基因mrna同源互补序列的rna（double strand rna， dsrna）导入细胞后，能够特异地识别该mrna，引起mrna的降解，从而导致相应的功能缺失。rnai提供了一种经济、快捷、gao效的抑制特异基因表达的技术手段，该技术已被广泛用于研究基因功能和chuan染性---及恶xingzhong瘤基因zhi疗领域。目前常用的rna干扰手段为mirna、 shrna和sirna等。
mirna是一类可以通过rnai机制调节基因表达的内源性小rna，人工mirna与shrna的设计原理基本相同，由于mirna具有内源性，因此其更易产生有效的基因沉默。
技术流程：
dsrna或pre-mirna被导入细胞后，pcr实验室，能够被一种特异的---内切酶（dicer）识别并切割成为小片段，pcr，这些片段在rna解旋酶的作用下解链。继之反义链在与体内一些酶（包括内切酶、外切酶、解旋酶等）结合形成rna---的沉默复合物（rna-induced silencing complex，risc），risc与mrna同源区进行特---结合，若mirna与mrna的结合位点配对，则切割mrna；若mirna与mrna的结合位点不配对，则抑制mrna的翻译。
20.primer设计的基本原则是什么？
答：引物设计的下列原则供您参考。
◆引物长度一般在18-35mer。
◆g-c含量控制在40-60%左右。
◆避免近3端有酶切位点或发夹结构。
◆如果可能避免在3端5个碱基有2个以上的g或c。
◆如果可能避免在3端1个碱基为a。
◆避免连续相同碱基的出现，---是要避免gggg或更多g出现。
◆退火温度tm控制在 58-60c 左右。
◆如果是设计点突变引物，突变点应尽可能在引物的中间。
21.为什么引物的od260/od280小于1.5 ？
答：引物应该全是dna，但是od260/od280的比值为什么那么低，怎么会有蛋白质污染？引物化学合成，哪里有机会污染到蛋白质？需要---的是od260/od280的比值不能用来衡量引物的纯度。od260/od280的比值过低一般是由于引物中c/t 的含量比较高所致。下表是一个20mer 同聚体引物的od260/od280的比值，清楚表明od260/od280的比值与引物的碱基组成密切相关。
5.长可以合成多长的引物？
答：引物越长，出现问题的概率就越大。有的公司合成过120base的引物，产率很低。除非需要，建议合成片段长度不要超过80mer，按照目前的引物合---率，80mer的粗产品，全长（还不一定正确）引物的百分比不会超过40%，后续处理还有丢失很多，的产量很低。
6.需要合成多少od数？
答：根据实验目的确定。一般pcr扩增，2 od引物，可以做200-500次50ul标准pcr反应。如果是做基因拼接或退火后做连接，1 od就足够了。但是有些研究人员，实时定量pcr，就做几次pcr，但是却要5-10 od。做全基因构建的引物都比较长，但是我们有些研究人员也要求高od数。片段越长， 全长得率就越低，荧光定量pcr，出错的几率就越大。超出需要之外的od数要求，其实也是对社会资源的一种浪费，同时也从一个侧面反映了部分研究人员---是新手的自信心不足，总觉得需要重复多次才能成功。
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