22.同样的od用page检测,eb染色为什么深浅不一?
答:通常可以用eb染色的方法来判断双链dna的量(如质粒dna),湖州pcr,因为eb可以嵌合到双链dna中。而合成的单链dna,由于碱基组成不同,形成二级结构的可能性不同,eb的染色程度也会有差异,比如oligo(dt)等不形成二级结构,eb染色效果就非常差。所以不要用eb染色的方法来定量,而用紫外分光光度计检测。同样道理,用eb染色来照片不适合所有引物。
23.引物不纯会有什么后果?
答:引物不纯可能会导致:1)非特---扩增;2)无法用预先设计在引物5′端酶切位点的酶切开,---是没有保护碱基的引物;3) 用于测序出现双峰或乱峰。解决办法重新合成或重新纯化。
24.已经溶解的引物,为什么原先使用正常,而过一段时间再使用就不好了?
答:如果溶解引物的水ph过低或污染了菌或---酶,会使引物降解。使用时没有充分解冻混合,液体不均匀也可能会造成引物加入量不准确。建议分装引物,实时荧光定量pcr,避免反复冻溶。建议使用10mmt ris ph7.5缓冲液溶解引物,因为有些蒸馏水的ph值比较低(ph4-5), 引物在这种条件下不稳定。还有一种可能性是引物没有问题,而是pcr使用材料---是模板的与先前使用的不完全一致。
lncrna芯片
long non-coding rnas(lncrnas)是一类转录本长度超过200 nt的功能性非编码rna分子。目前的研究已证实,lncrna参与x染色体沉默,基因组印记以及染色质修饰,转录ji活,转录干扰,核内运输等多种重要调控过程。随着对lncrna在哺乳动物进化及人类---发生和发展中作用的日益关注,lncrna调控机制已成为当前遗传学研究的---问题。
筛选出差异表达的lncrna是研究其在人类---发生中所扮演角色的基础。富衡生物为用户提供高通量的lncrna芯片进行lncrna表达谱分析,---怎么做,该芯片基于agilent的sureprint技术生产,实验。
技术优势
信息覆盖广泛:覆盖了多个quan威lncrna数据库发布的数据;提供人,小鼠,大鼠的lncrna检测。
lncrna和mrna同时检测:芯片上包含有的lncrna和新的mrna序列检测探针。一次芯片实验可同时对lncrna和mrna进行分析。
平台成熟---:采用agilent原位喷墨合成技术,了高检测灵敏度和特---。
数据分析:提供lncrna和mrna表达谱差异分析和功能分析,以及二者的关联分析。
通常活性氧阳性对照在---细胞20-30分钟后可以---提高活性氧水平。
收集细胞后装载探针:按照1:1000用无培养液稀释dcfh-da,使终浓度为10微摩尔/升。细胞收集后悬浮于稀释好的dcfh-da中,细胞浓度为一百万至二千万/毫升,37℃细胞培养箱内孵育20分钟。每隔3-5分钟颠倒混匀一下,使探针和细胞充分接触。用无细胞培养液洗涤细胞三次,以充分去除未进入细胞内的dcfh-da。直接用活性氧阳性对照及自己感兴趣的---细胞,荧光定量pcr,或把细胞等分成若干份后---细胞。通常活性氧阳性对照在---细胞20-30分钟后可以---提高活性氧水平。
2.、检测
对于原位装载探针的样品可以用激光共---显微镜直接观察,或收集细胞后用荧光分光光度计、荧光或流式细胞仪检测。
对于收集细胞后装载探针的样品可以用荧光分光光度计、荧光或流式细胞仪检测,用激光共---显微镜直接观察也可以。
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