感受态细胞-南京英瀚斯-眉山细胞

软gu细胞培养

(1)---脱颈处死，备皮，用75%酒精消毒背部及四肢皮肤。

(2)无菌操作下取下双侧股骨头及膝关节(保留周围肌肉，软gu不能暴露)，75%酒精浸泡5分钟，转移至pbs缓冲液中，带入超净工作台，细胞融合实验报告，剔除关节周围附着的软组织，打开髋、膝关节，用尖刀削取关节软gu组织，置入装有pbs缓冲液的无菌培养皿，防止软gu组织被风干。

(3)pbs缓冲液充分漂洗软gu小块3次，然后用小剪刀将软gu块切碎至约imm3大小。

(4)再次用pbs缓冲液冲洗3次，滤干，将细小的软gu块置入放有0.2%的ii型胶原酶3ml的广口瓶里，摇匀后置于37°c恒温震荡箱中---，40分钟后将上层---液转移至15ml规格离心管中，800r/min离心5min，收集细胞(沉淀物)，加入含10%的胎牛xue清dmem培养液4ml并吹打混匀，制成软gu细胞混悬液。

(5)把---所得的软gu细胞混悬液收集于离心管中，经滤网过滤后用细胞计数板计数，感受态细胞，并把细胞混悬液密度调整为2x105/ml接种于25cm2规格的培养瓶中。将培养瓶放置于co2培养箱内。培养条件为37°c、5%co2。

(6)未---完的软gu小块继续用ii型胶原酶如_上法---，直至软gu块基本消失。

(7)每日在倒置显微镜下观察软gu细胞生长情况并拍照保存。