免yi共沉淀（co-ip检测）是以抗ti和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的方法。当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质与蛋白质间的相互作用也被保留下来。用预先固化在beads上的蛋白质a的抗ti免yi沉淀a蛋白，那么与a蛋白在体内结合的蛋白质b也能一起沉淀下来，---多少钱，再通过蛋白变性分离，对b蛋白进行检测，进而证明两者间的相互作用。
3、参数设置
使用488nm激发波长，525nm发射波长，pcr，实时或逐时间点检测---前后荧光的强弱。dcf的荧光光谱和fitc非常相似，可以用fitc的参数设置检测dcf。dcf的激发光谱和发射光谱参考下图。
4、其它说明
阳性对照可以按照1：1000的比例使用。例如装载好探针的细胞共1毫升，可以加入1微升的阳性对照---。通常---后20-30分钟内可以观察到非常---的活性氧水平升高。对于不同的细胞，活性氧阳性对照的效果可能有较大的差别。如果在---后30分钟内观察不到活性氧的升高，可以适当提高活性氧阳性对照的浓度。如果活性氧升高得过快，可以适当降低活性氧阳性对照的浓度。
另外，对于某些细胞，如果发现没有---的阴性对照细胞荧光也比较强，可以按照1：2000-1：5000稀释dcfh-da，使装载探针时dcfh-da的浓度为2-5微摩尔/升。探针装载的时间也可以根据情况在15-60分钟内适当进行调整。
rna提取
1.弃去培养液，用pbs清洗两次1-2。
2.弃去pbs，用1000u1吸干净残余pbs。
3.加1ml trizol研磨b 41。
4. 1.5miep管标号与每孔相对应备用。
5.研磨好的溶液转移至对应的 ep管。
6.往每个ep管中加入250ul，剧烈震荡30s， 冰上静置12min[问l。
7. 所有样品4c离心，转速: 13500转1分钟，时间: 15min.
8. 再次标记一批同样编号ep管。
9.离心后吸上清液400u1移入相应编号的ep管中，---，再加入400ul异充
分混匀。4c冰箱35min。
10. 4c离心，云南pcr，转速: 13500转1分钟，时间: 10min.
11.弃去.上清液，加1m175%---，轻摇7]。
12. 4c离心，10600转/分钟，时间: 5min.
13. 弃上清液滤纸吸干。
14. 加depc水10ul溶解，-80c保存。进行逆转录前测浓度。
组织rna提取
1、剪米粒大小组织块放入ep管中标号。
2、ep管中加300ul trizol浸泡30分钟或更久。
3、用研磨棒研磨，以肉眼很难看到组织为宜。
4、加700u1 trizol静 置5分钟。
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