细胞实验外包-英瀚斯生物科技-汉中细胞实验

细胞传代培养

操作步骤

1.将长满细胞的培养瓶中原来的培养液弃去。

2、加入0.5- -1ml 0.25%胰酶溶液，使瓶底细胞都浸入溶液中。

3、瓶口塞好橡皮塞，放在倒置镜下观察细胞。随着时间的推移，原贴壁的细胞逐渐趋于圆形，在还未漂起时将胰酶弃去，加入10m培养液终止---。观察---也可以用肉眼，当见到瓶底发白并出现细zhen孔空隙时终止---。一般室温---时间约为1- -3分钟。

4、用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液，分到另外两到三瓶中，细胞实验外包费用，实践培养液塞好橡皮塞，置37°c下继续培养。第二天观察贴壁生长情况。

附:---液配制方法:

称取0.25克胰酶蛋白酶(活力为1 : 250)， 加入100ml无ca2+、mg2+的hanks液溶解，滤器过滤chu菌，4°c保存，用前可在379c下回温。胰酶溶液中也可加入edta，使zui终浓度达0.02%。

脂质体瞬时转染

1、细胞h9c2 (hela) 6孔板hela1x10°/孔。

2、转染前换上没有抗sheng素的dmem+胎清(10%)。

3、将质粒dna (约2-4ul) 2ul 加入dorf管中+dmem至50u1。

4、脂质体5ul补培养基至50ul混匀静止5分钟(质粒与脂质体比例为1:2或1.5:2.5)。

5、将含有脂质体的培养基与含质粒的混合总体积100ul室温放置30分钟。

6、吸取混合物均匀加入每一个孔中。

7、将6孔板放入培养箱中继续培养6小时后吸出培养基换上新配置的培养基dmem6ml+胎清600u1+三抗300u1。

8、培养24小时。