在各种致病因素作用下,大脑实质受到损伤后可出现神经功能改变,如偏瘫、平衡失调等。
对于神经系统---动物模型而言,造模结束只是步,验证个体模型是否成功是第二步,而控制组内个体特征一致性是第三步。
采用神经功能评分是重要的观察指标,可以用来在体评价模型是否成功或者病变---程度。尽量控制动物模型的评分一致性是很困难但不得不做的一件事。
这里介绍三种常见的啮齿类神经功能评分方法。
一、longa评分法
无神经功能缺陷:0分;
瘫痪侧前爪不能完全伸展:1分;
行走时向瘫痪侧转圈:2分;
行走时向瘫痪侧倾倒:3分;
不能自动行走,存在意识丧失现象:4分。
二、bederson评分法
抓起动物的尾巴,使动物离台面10cm高。此时,正常大鼠的前爪处于伸直状态,而存在神经功能病变的动物则可出现如下表现:
无神经功能缺陷:0分;
动物尾巴提起后,瘫痪侧前肢回收并屈于腹下,而正常侧肢体伸向台面:1分;
除第二条表现以外,俯卧于台面时向瘫痪侧侧推动物的阻力较正常侧明显降低:2分;
除条和第二条以外,动物行走时向瘫痪侧旋转:3分。
三、平衡木评分法
一根长为80cm、宽为2.5cm的木条,水平固定在离台面10cm高度的地方,然后让动物在木条上行走。
能跳上平衡木条,可以自由行走但不跌倒:0分;
能跳上平衡木条,动物在上面行走会跌下,但跌下的机会小于50%:1分;
能跳上平衡木条,动物在上面行走会跌下,但跌下的机会大于50%:2分;
动物在正常侧身体的帮助下可以跳上平衡木条;但是瘫痪侧的后肢不能够帮助身体向前移动:3分;
动物无法在平衡木条上行走,但是可以坐在木条上:4分;
将动物放在木条上,动物很快会掉落下来:5分。
难点与关键点
将灌注针插入主动脉内是灌注固定的关键,也是难点。首先准确找到主动脉,这是此步骤的要点。可用温生理盐水将胸腔内的---冲洗干净,用镊子轻轻夹住心 外膜(夹的越少越好,以免影响取材)将---向左上方提起,即可看清主动脉,又可使灌注针很容易地插入主动脉内。插入时动作要慢,针尖方向不要偏向右侧,以 免刺入右心房,如果感到有阻力,则将针退后、调整方向重新进针,直到进入主动脉,灌注针进入主动脉后可在---的上方看到其位置,灌注针进入主动脉的长度 好为 3~5 毫米,然后用丝线扎紧。切勿将灌注针放在左心室内,这样由于主动脉瓣的关闭,灌注液很难进入主动脉,而是沿着心室的切口流出,动物实验,致使灌注失败。另 外,灌注针插入成功后,一定要用剪刀剪开右心耳而不是右心室,实验动物,这是灌流液的出口。剪开心尖的位置一定要掌握好,不能偏右使灌注针插入右心室。
敲低效果验证方法:
rt-pcr
检测mrna,是否仍存在靶 mrna?或是否敲低成功?
这种方法非常灵敏,但无法准确预测蛋白质水平。
蛋白质印迹实验
使用抗ti来检测样品中的靶蛋白表达以及多种相关蛋白质表达,从而观察靶蛋白敲除对其它蛋白质的影响。
免yi细胞化学法
可检测是否存在敲低蛋白。
其优势在于利用双重染色法,可同时检查敲除对其它蛋白质表达的影响以及其它蛋白质在细胞中的位置。
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