二、使用说明
1、装载探针
对于---时间较短(通常为2小时以内)的细胞,先装载探针,后用活性氧阳性对照及自己感兴趣的---细胞。对于细胞---
时间较长(通常为6小时以上)的细胞,先用活性氧阳性对照及自己感兴趣的---细胞,后装载探针。
原位装载探针:本方法仅适用于贴壁培养细胞。按照1:1000用无培养液稀释dcfh-da,使终浓度为10微摩尔/升。去除细胞培养液,加入适当体积稀释好的dcfh-da。加入的体积以能充分盖住细胞为宜,通常对于六孔板的一个孔加入稀释好的dcfh-da的体积为1毫升。37℃细胞培养箱内孵育20分钟。用无细胞培养液洗涤细胞三次,pcr实验室,以充分去除未进入细胞内的dcfh-da。
18.引物是经过page纯化的,为什么还有碱基缺失或插入?
答:理论---析型page变性电泳,可以区分引物之间一个碱基的差别。但是制备page电泳,上样量都是非常大,电泳时的条带非常宽,---多少钱,带与带之间有重叠,分辨率已下降,电泳后割带回收目的引物时,很难说不割到差别仅几个碱基的引物。国内有一个不好的现象,page纯化的引物,pcr,---是长引物要的量都比较高,导致割的条带有时可能比较宽。建议:您如果减少od数,pcr实验室,引物遇到的问题可能就会少一些。
19. taqman 探针设计的基本原则是什么?
答:下列原则供您参考。
◆taqman 探针位置尽可能靠近扩增引物(扩增产物50-150bp),但不能与引物重叠。
◆长度一般为18-40mer 。
◆g-c含量控制在40-80%左右。
◆避免连续相同碱基的出现,---是要避免gggg或更多g出现。
◆在引物的5端避免使用g。
◆选用比较多的碱基c。
◆退火温度tm控制在 68-70c 左右。
有用的荧光染料参数
分子生物学检测服务
随着生命科学和化学的不断发展,人们对生物体的认知已经逐渐深入到微观水平。从单个的生物体到qi官到组织到细胞,再从细胞结构到---和蛋白的分子水平,人们意识到可以通过检测分子水平的线性结构(如---序列),来横向比较不同物种,同物种不同个体,同个体不同细胞或不同生理(病理)状态的差异。这就为生物学和医学的各个领域提供了技术平台。分子生物学检测技术是现代分子生物学与分子遗传学取得进步的结晶,是在人们对基因的结构以及基因的表达和调控等生命本---题的认识日益加深的基础上产生的。近年来,分子生物学检测技术的方法学研究取得了进展,先后建立了各种分子生物学检测技术。
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